Western Blot實驗問答集錦之蛋白marker篇
更新時間：2017-03-01 點擊次數：6556
Western Blot （WB）即蛋白免疫印跡實驗。是將蛋白樣本通過聚丙烯酰胺電泳按分子量大小分離，再轉移到雜交膜（blot）上，然后通過一抗/二抗復合物對靶蛋白進行特異性檢測的方法。WB是進行蛋白質分析zui流行和成熟的技術之一。本篇討論Western Blot實驗中關于蛋白marker的常見問題分析，有助于成功完成WB。
1.蛋白marker為什么跑的條帶不清楚？
答：首先確認膠的濃度、PH值，離子強度是不是正常，這些都會影響條帶的質量。其次確定電泳液的PH、離子強度是否正確，如甘氨酸濃度太低時，蛋白會濃縮不好；電泳液新鮮配制。
2.為什么蛋白marker總是跑得比其他樣品慢？
答：你的蛋白marker跑得比其他指示劑慢，可能只是因為他們的電泳速度不一樣，不是一個公司生產的，選擇愛必信一籃子采購就可以避免這樣的問題了。
3.為什么轉膜時marker不清楚？
答：在western Blot過程中，蛋白Marker就像個螺絲釘一樣雖然是個小細節，然而就是這樣一個小細節對實驗結果有著不可忽視的作用。這個 Western Blot參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小，只有標準量無誤了，實驗結果才有說服力，除此之外，蛋白標準還有表示轉移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇正確的蛋白Marker也是western blot實驗成功的必要條件之一。
4.怎么制作蛋白marker？
答：少年，你能提出這個問題是很有前途的。蛋白marker制作復雜，愛必信有現成的，*，實驗效果*，拿好不謝！
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