淋巴細(xì)胞分離液的基本理論
更新時(shí)間:2017-10-11 點(diǎn)擊次數(shù):3278
淋巴細(xì)胞分離液取新鮮抗凝血1ml,與生理鹽水1:1混勻后,小心加于2ml細(xì)胞分離液之液面上;以400g(約1500轉(zhuǎn)/分,半徑15cm水平轉(zhuǎn)子)離心20分鐘,此時(shí)離心管中由上至下細(xì)胞分四層。*層:為血漿層。第二層:為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層。第三層:為透明分離液層。第四層:為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含生理鹽水4-5ml的試管中,充分混勻后,以400g(約1500轉(zhuǎn)/分)離心20分鐘。沉淀經(jīng)2次洗滌后即得所需淋巴細(xì)胞。
淋巴細(xì)胞分離液方法,取肝素抗凝血1ml加Hanks液1m1稀釋后,沿管壁徐徐滴流疊加盛有2m1淋巴細(xì)胞分離液的試管內(nèi)(注意勿與分離液混合,然后2000r/min水平離心20min,醫(yī)學(xué)|教育|網(wǎng)搜集整理管內(nèi)分為4層,自上而下依次為血漿,單個(gè)核細(xì)胞,顆粒白細(xì)胞、紅細(xì)胞(圖2-1)。用毛細(xì)管伸至單個(gè)核細(xì)胞層中(位于細(xì)胞分離液與血漿的界面上),沿管壁輕輕吸出全部細(xì)胞。然后用Hanks液洗兩次,每次r/min離心10min,zui后用RPMIl640培養(yǎng)液將細(xì)胞配成2×106/m1的細(xì)胞懸液備用。
淋巴細(xì)胞分離液主要組成成份是葡聚糖(右旋糖酐)與泛影酸葡甲胺。適用于從人抗凝血液中分離單個(gè)核細(xì)胞(主要為淋巴細(xì)胞),無(wú)菌條件下所分離的細(xì)胞可用于免疫學(xué)檢測(cè)。