免疫（共）沉淀（IP/CoIP）試劑盒常見問題匯總

Q：步驟上的可選步驟能否省略？

A：該試劑盒是經過實驗驗證的，再進行驗證實驗的時候實驗室都是要做這個可選步驟的，建議不要省略，按照說明書操作。

Q：protein A和protein G beads怎么選？

A：各5ul就可以了

Q：超聲破碎冰上操作是必須的嗎？4℃條件能否微調？

A：建議冰上操作，4℃是可以微調的。

Q：beads出現吸不出來的情況，怎么處理？

A：吸之前需注意槍頭要剪一下再吸，如若beads吸不上來，可加入等體積的20%乙醇混勻后再吸。

Q：如果沒有超聲破碎儀的話，能不能用酶解的辦法破碎細胞？

A：酶解和超聲都是可以的，酶的濃度按照正常實驗室使用濃度就可以。

Q：實驗的時候能抗體beads一起加嗎？還是先加抗體再加beads？

A：都可以，建議參考說明書使用，先加抗體再加beads。

Q：washing buffer一定要使用配套的嗎？

A：zui終濃度是稀釋的1*的washing buffer都可以。

Q：怎么看出現的條帶結果？

A：比較關注的就是三個泳道，input和IgG以及檢測互相作用的泳道，理論上input有一條目的條帶，IgG沒有條帶。如果input沒有條帶，說明在進行免疫共沉淀之前沒有進行WB驗證，建議先驗證之后再從頭做。IgG陰性對照出現條帶的話是不正常的，應該是受重鏈和輕鏈的影響，說明使用的二抗不正確，建議更換特異性更強的二抗。

Q：免疫共沉淀試劑盒裂解液能用于組織嗎？比例又是如何？

A：可以的，不過要事先將組織研磨成勻漿，比例和細胞比例一致。

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