Forskolin的功能與作用

 

  Forskolin可以使膜，細胞或組織制備液中cAMP含量上升。Forskolin 不僅可以活化AC 而且可以與某些其它蛋白相互作用，包括葡萄糖轉運蛋白和離子通道。Forskolin能夠促進9種不同獨立AC形式的活化，雖然對AC9效率有點低，這可以用于提供一種鑒定和量化G蛋白 (Gs)–AC復合物高親和性結合位點的方法。G蛋白偶聯受體活化G蛋白有助于細胞中Forskolin刺激的cAMP 產生，因為 G蛋白-Forskolin對AC活性有增強作用。

 

  Forskolin的細胞內濃度由兩個細胞膜上的酶調節，促進 ATP 合成 cAMP， 而磷酸二酯酶把 cAMP 降解成 AMP。cAMP 的激活是由不同的 GTP 結合蛋白偶聯受體受體（GPCR）和 GTP 結合蛋白（Gs 或者 Gi）相互 作用而調節。蛋白是由 Gα （i 或者 s） 、Gβ 和 Gr 組成的異源三聚體GPCR 激動劑使 GTP 和 Gα 結合，產生構象變化，導致 Gα 與 Gβ γ 分離.分離后，Gα s 主要與 AC 激活有關，而 G α i 則是抑制 AC 活性。測量胞內 cAMP 是檢測化合物對 GPCR 介導的 AC 活性的激活或者抑 制作用的理想方法。細胞制備，細胞長到 70%的時候， 用不含鈣和鎂離子的 PBS 洗一次， 然后用 5mM EDTA(PBS 配制成的)37 度消化 5min，275g 離心 10min.HBSS 1X 重懸，計數，275g 離心 5min.用 stimulation buffer 重懸細胞，按 6*105 個/ml 的濃度稀釋細胞（3000/孔） 分析步驟 1 Gα s 受體分析 cAMP 標曲 Gα i 受體分析 cAMP 標曲 目的 確定 cAMP 分析的敏感性 （IC50 值）和動態范圍 （IC10-IC90） 。確定zui大分析窗的*細胞 濃度，對于 Gα i 分析，確定 Forskolin 的 EC90 以用于激動 劑分析。