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                關于Ficoll,您不得不知的那些事兒

                更新時間:2019-02-28      點擊次數:6157

                                                 

                如果想簡單、快速地分離細胞,大家反應肯定是密度梯度離心介質;如果您想分離人淋巴細胞,那當然少不了Ficoll啦。

                Ficoll是蔗糖的多聚體,呈中性,平均分子量為400,000,當密度為1.2g/ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜。紅細胞、粒細胞比重大,離心后沉于管底;淋巴細胞和單核細胞的比重小于或等于分層液比重,離心后漂浮于分層液的液面上,也可有少部分細胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細胞,就可從外周血中分離到單個核細胞。

                                                

                PBMC(Peripheral blood mononuclear cell),外周血單個核細胞,其細胞類型為血液中具有單個核的細胞,主要包括淋巴細胞和單核細胞等,其中淋巴細胞占很大一部分。

                愛必信淋巴細胞分離介質Lymphocyte Separation Medium(human, Ficoll-Paque)是一種無菌的、即用型的Ficoll-泛影酸鈉密度梯度介質,能夠簡單快速的從少量或大量的人外周血、骨髓和臍帶血中高產和高純度的提純淋巴細胞。本品內毒素水平非常低,小于0.12EU/mL,分離所得的細胞中95%左右為單個核細胞,細胞存活率大于90%,回收率為60%左右。

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                Ficoll-Paque分離人外周血PBMC的示意圖:

                                                  

                操作protocol:

                01\ 樣本準備

                將2mL外周血轉移到15mL離心管中;

                用等量的2mLPBS稀釋外周血,注意吹打或顛倒混勻(如需無菌操作請在超凈臺內完成);

                02\ 分離步驟

                在離心管中加入3mL 提前混勻的Ficoll-Paque(無菌操作請用注射器);

                將稀釋好的血液樣本緩慢加在Ficoll細胞分離液上,保證Ficoll與樣本之間界面清晰(注意不要吹打或顛倒混勻);

                離心300g,20℃,20min(注意要設置緩降,不能驟停);

                輕輕移除上層分離液(血漿);

                                                       

                                                                       愛必信abs930 Ficoll-Paque分離淋巴細胞實驗圖

                03\ 洗滌淋巴細胞

                吸取“白膜層”PBMC,將其轉移到新的15mL離心管中;

                加3-5倍PBS充分混勻;

                離心300g,20℃,10min(*棄去上清,沉淀即PBMC細胞);

                用適量PBS重懸、進行細胞計數(當細胞量>10E7時,要擴大相應試劑用量);

                離心300g,10min(*棄去上清);

                備注:

                (1)實驗操作前,先將Ficoll-Paque和血液樣本在室溫放置一段時間,保持溫度為18℃和20℃;

                (2)分離PBMC步離心的時候,一定不能設置制動或設置低水平的制動,否則將分層混亂。

                 

                產品訂購信息: 

                   貨號   產品名稱   規格
                   abs930   Lymphocyte Separation Medium(human, Ficoll-Paque )   50ml/100ml
                   abs9102   Percoll   100ml

                 

                愛必信特色產品線(全部現貨):
                二抗、標簽抗體、對照抗體;WB相關:ECL發光液、預染marker、預制膠;IHC相關:二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;細胞因子、信號通路調節劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒、呼吸爆發試劑盒;動植物提取物,定制服務(抗體/多肽/蛋白)...

                 

                愛必信(上海)生物科技有限公司

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