如何利用牛血清白蛋白測定蛋白濃度？

　　牛血清白蛋白（BSA）在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,一般作為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，穩(wěn)定酶活性，并可防止酶的分解和非特異性吸附；ELISA、WB中也常常用到，比如封閉液，樣本稀釋液，酶結(jié)合物稀釋液都可以用BSA；蛋白定量時作為標(biāo)準(zhǔn)物；酶活測定反應(yīng)中作為陰性對照；血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用，在動物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中，添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。

　　BSA一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环€(wěn)定或活性低。加入BSA后，它可能起到“保護(hù)”或“載體”作用，不少酶類添加BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不會受到什么影響。對多數(shù)底物DNA而言，BSA可以使酶切更*，并可實(shí)現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃，酶切反應(yīng)超過1h時，BSA可以使酶更加穩(wěn)定，因?yàn)樵诓缓珺SA的反應(yīng)緩沖液中，許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10~20min甚至更短的時間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限制性內(nèi)切酶活性的金屬離子和其它化學(xué)物質(zhì)。

　　測定蛋白濃度

　　按50：1配置工作液。10ul蛋白標(biāo)準(zhǔn)液+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標(biāo)準(zhǔn)液加入96孔板的第1~8標(biāo)準(zhǔn)孔中，在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ul工作液，室溫放置2小時。用酶標(biāo)儀測定蛋白濃度，依標(biāo)準(zhǔn)曲線算出蛋白濃度。