WB實驗中的亮眼“彩虹”——預染蛋白marker

蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot，是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過上樣緩沖液處理，使組織或細胞樣品中的蛋白質帶上電荷，再進行凝膠電泳，根據不同分子量的蛋白質在電場中的遷移速率不同進行區分，后將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，然后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質檢測技術。現已廣泛應用于基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。
 

總結起來，WB的簡要步驟如下圖所示：

圖1. Western Blot簡要操作步驟圖
 

Western Blot實驗結果的可靠與否，除目的蛋白條帶清晰、無背景、雜帶等干擾外，分子量大小是確定目的蛋白的重要參考因素之一。如何確定蛋白的分子量大小？我們需要用到蛋白分子量標準（蛋白Marker）來作為丈量蛋白分子量的“尺子”。并且，蛋白Marker也是實驗中必須的陽性對照，Marker精確無誤，實驗結果才有說服力。
 

目前常用的蛋白Marker分為非預染蛋白Marker和預染蛋白Marker。非預染(Pre Mixed)蛋白Marker在實驗室出現，它是幾種已知分子量并純化好的蛋白質預混液（目標分子量也在這個范圍內）。因為電泳過程中*看不到，要和目標蛋白一起等到后經過染色脫色后才能起指示作用，無法在實驗中起預示作用，使用起來很不方便。
 

為了實時監測電泳動態，預染蛋白Marker應運而生。預染蛋白Marker（Prestained Marker），是將標準蛋白與染料共價耦聯，在電泳過程中或者轉膜時可以肉眼直接觀察到的一種蛋白分子量標準，根據顏色又分為多色預染蛋白Marker和單色預染蛋白Marker。預染蛋白Marker可以幫助我們在電泳時、電泳后，以及轉膜后監測電泳情況，估計遷移率，在Western Blot轉膜以后可以直接觀察蛋白轉膜是否*等。
 

好的預染蛋白Marker，重要的兩點就是條帶清晰和位置準確；清晰的條帶在電泳過程中，可以更好地提示我們電泳進程，并且在轉膜后也可以作為轉膜成功與否的判斷標準；而位置準確是所有marker類產品的*要求，只有“尺子”刻度精確，量出的結果才真實可靠，作為確認目的蛋白的重要參考手段之一，蛋白Marker位置準確，更是重中之重。當然，在滿足這兩個前提條件下，如果再可以滿足保存時間長，不易降解，*等優點那就更好了。小編在這里為您推薦兩款愛必信的預染蛋白Marker：abs922，abs924，和金標準Thermo26616分子量基本上沒有偏差，比其他公司的預染蛋白marker具有更準特性。同時，條帶更為清晰銳利，上樣量少也可顯 示出清晰條帶。對比圖如下：

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