小愛(ài)科普: 多肽的保存及溶解

一. 多肽的保存
 

多肽保存：如果以凍干粉形式的多肽，經(jīng)密封包裝可在常溫條件下穩(wěn)定運(yùn)輸，但是溶解狀態(tài)的多肽不宜長(zhǎng)期保存。

保存：所以需要長(zhǎng)期保存的多肽，應(yīng)以凍干粉形式存放在含有干燥劑的密封容器內(nèi)，置于-20°C保存，-80°C效果更好，可以大限度地避免多肽降解，避免了被細(xì)菌降解和氧化，也可以避免二級(jí)結(jié)構(gòu)的形成。大多數(shù)肽用這種儲(chǔ)存方式可以使多肽保存半年以上，穩(wěn)定性差一些的多肽一般也可以保存3個(gè)月以上。

打開(kāi)包裝： 在打開(kāi)包裝和稱重前，請(qǐng)先將多肽在干燥器中平衡至室溫。因多肽往往具有吸濕性，未經(jīng)平衡到室溫的多肽在打開(kāi)蓋子后易凝結(jié)，從而降低了多肽產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

稱重： 迅速稱取您所需的多肽，并將剩余多肽繼續(xù)儲(chǔ)存在-20°C或更低溫度。當(dāng)無(wú)法冷凍干燥時(shí)，比較好的方法是分裝成較小的樣量存放，分批次取用，并盡快使用。

其他：含Met,Cys,Trp,Gln或Asn的多肽容易降解，所以相對(duì)于其他不含此類氨基酸的多肽，其保存期較短,尤其是N末端為Gln，建議盡快使用。

二.多肽的溶解

溶解多肽是一個(gè)很重要的環(huán)節(jié)。如果溶解不當(dāng)可能導(dǎo)致肽損失或者實(shí)驗(yàn)失敗。肽的溶解性主要取決于肽的序列，所以，設(shè)計(jì)多肽時(shí)要加注意，肽序列中建議應(yīng)包含20%的帶電殘基以增加其溶解度。 　　

在使用之前，客戶可以遵循以下三個(gè)基本原則來(lái)選擇合適的溶劑溶解多肽。

首先，所選溶劑一定能充分溶解多肽；其次，所選溶劑能與實(shí)驗(yàn)條件兼容；后，所選溶劑不能與肽反應(yīng)，也不能使肽降解。

只要肽的量允許，可以先用少部分肽溶解，然后再將全部樣品溶解。如果需要從溶劑中回收肽，可以選擇 一種初始溶劑使其在凍干后容易去除。 　　

以下建議或許對(duì)您溶解肽有所幫助： 　　

1. 少于5個(gè)氨基酸的肽一般溶于水溶液，強(qiáng)疏水的氨基酸（W，I，L，F(xiàn)，M，V，Y）除外。 　　

2. 如果帶電氨基酸平均分布于全部序列中，那么含有>25%帶電氨基酸（E，D，K，R，H）的親水肽和含有<25%疏水氨基酸的肽一般都能溶于水溶液。多肽的純化系統(tǒng)一般為0.1%TFA/水和0.1%TFA/ ACN。因此，如果肽溶解在沒(méi)有緩沖能力或者緩沖能力很弱的緩沖液中，結(jié)果可能導(dǎo)致肽溶液呈酸性。在使用別的方法溶解肽時(shí)務(wù)必使溶劑的pH值近乎中性。酸性肽（E+D殘基數(shù)多于K+R+H殘基 數(shù)）和堿性肽（K+R+H殘基數(shù)多于E+D殘基數(shù)）在中性pH值條件下比在酸性pH值下更易于溶解。　　

3. 對(duì)于疏水氨基酸含量為50%～75%的肽，即使序列中含有>25%帶電氨基酸也有可能不溶于水或者部分溶解。先把肽溶于少量的強(qiáng)有機(jī)溶劑如DMF、ACN、異丙醇、乙醇、乙酸、4-8M GdnHCl、 尿素，或者DMSO（序列中沒(méi)有C，W，M時(shí)），及其它類似的有機(jī)溶劑中。將溶解肽的有機(jī)溶 劑緩慢地逐滴加入水溶液中，如果溶液變渾濁，可能是達(dá)到了溶解極限，繼續(xù)溶解就沒(méi)什么用了。 需要注意的是，開(kāi)始選擇的溶劑應(yīng)該與實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)兼容。 　　

4. 疏水氨基酸含量>75%的強(qiáng)疏水肽一般也不溶于水溶液。此類肽也應(yīng)該先用強(qiáng)有機(jī)溶劑（如TFA，甲酸）溶解，如果將其加入到水溶液中也可能產(chǎn)生沉淀。后的肽溶液可能需要高濃度的有機(jī)溶劑使之變性，而有機(jī)溶劑一般不用于活細(xì)胞的生物功能研究。 　　

5. S，T，E，D，K，R，H，N，Q，Y含量高（>75%）的多肽序列容易形成多余的分子間氫鍵網(wǎng)絡(luò)， 在濃的水溶液中容易形成凝膠。此類肽可以用步驟3所述方法溶解。為了減少溶解中可能出現(xiàn)的問(wèn)題，建議客戶從設(shè)計(jì)上和序列上多加考慮，以改善肽的溶解度。

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