文獻分享：紅細胞裂解液法體外分離培養兔骨髓間充質干細胞

骨髓間充質干細胞是存在于骨髓腔內具有很強增殖 能力及多向分化潛能的一類成體干細胞，在一定條件下其不僅可以分化為同源于中胚層的間質細胞，還可以誘導分化為骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、上皮樣細胞、 心肌細胞、肝細胞等。近年來隨著組織工程技術的快速發展，骨髓間充質干細胞的體外分離、培養及其增殖特 性的相關研究逐漸受到越來越多研究人員的關注。目前， 骨髓間充質干細胞常用的分離培養方法有全貼壁篩選培 養法、密度梯度離心法和流式細胞儀分離法等，由于骨髓液中存在大量的紅細胞，近幾年開始有人向骨髓液中加入紅細胞裂解液來提高分離純化骨髓間充質干細胞的效率，以期獲得純度高、數量多的骨髓間充質干細胞。實驗探索了如何通過紅細胞裂解液法獲得骨髓間充質干細胞，及骨髓間充質干細胞各代細胞的增殖能力。

紅細胞裂解液法分離純化骨髓間充質干細胞，有以下優點：

①、經紅細胞裂解液處理后的骨髓液內含有大量各種促進細胞生長的因子。紅細胞及血小板的胞漿內含有豐富的促細胞生長因子，這些細胞因子可促進骨髓間充質干細胞的成集落的簇狀生長，為骨髓間充質干細胞的生長提供更適應的微環境，以利于骨髓間充質干 細胞的增殖。
②、增加骨髓間充質干細胞的濃度，提高骨髓間充質干細胞的增殖速度。經紅細胞裂解液處理后，骨髓液內細胞雜質明顯減少，通過離心純化，可以得到純度更高的含有骨髓間充質干細胞的骨髓液，進而 可以明顯較少骨髓間充質干細胞的原代培養時間，提高 骨髓間充質干細胞的增殖速度。
③、早期促進骨髓間充質干細胞的貼壁。實驗發現經紅細胞裂解液處理后，早期骨髓間充質干細胞的貼壁細胞數量明顯較未經紅細 胞裂解液處理所獲得的數量多。可能的原因為經紅細胞 裂解液處理后骨髓液內紅細胞及血小板數量極少，影響骨髓間充質干細胞貼壁的雜質相對減少，為骨髓間充質干細胞貼壁保留出更多的空間，利于骨髓間充質干細胞的早期貼壁。 

上述實驗所采用的紅細胞裂解液法所培養出的骨髓間充質干細胞在生長至13d左右時細胞成典型的長梭形，排列規則均一，幾乎無其他雜質細胞存在，細胞融合接近100%；經傳代細胞培養比較不同代數細胞生長曲線時，發現P4代細胞具有*的增殖活性，適宜 于進一步的實驗研究；通過細胞免疫熒光及流式細胞儀鑒定所培養的細胞表面分子CD44表達陽性，CD34 表達陰性，符合骨髓間充質干細胞的細胞生物學特性。故紅細胞裂解液法也能夠分離出高純度的骨髓間充質干細胞，其具有穩定的生物學活性，較好的增殖活性，是一種操作簡便、易于復制的骨髓間充質干細胞分離方法。

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本文參考文獻：
紅細胞裂解液法體外分離培養兔骨髓間充質干細胞       張衛東，章方彪，史宏燦，譚榮邦，葉 鋼，李廣宇，潘 樞，孫 飛(揚州大學臨床醫學院，江蘇省揚州市 225001)