螢光素酶報告基因檢測so easy！

前幾期小愛依次給大家介紹了螢光素酶報告基因相關知識，想必大家對于螢光素酶報告基因檢測技術有了一定了解。話不多說，本期給大家安利另一款單螢光素酶報告基因檢測試劑盒——愛必信海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60343）。

一、產品簡介

真核基因表達調控研究常用的方法是進行報告基因的檢測，生物發光法又是報告基因檢測常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉化，并發射出光子。海腎螢光素酶跟螢火蟲螢光素酶類似，也是一胞內蛋白，但是它從海腎中分離得到，大小為36kDa，

發光作用原理也比較簡單：海腎螢光素酶只需要氧氣就可以催化腔腸素（反應底物），氧化生成高能產物coelenteramide，并發出藍光，MAX發光波長為480nm。其作用反應式為如圖1，海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60343）可為在哺乳動物細胞中的表達提供快速、靈敏、穩定的檢測方法。

圖1 海腎螢光素酶反應化學式

二、產品信息

三、產品特點

1、快速：細胞裂解在10-15min內完成；
2、方便：試劑易于配制，樣品檢測步驟簡單。

四、實驗流程

圖2 海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒操作流程

五、具體應用

海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒的適用于單報告基因檢測，與螢火蟲螢光素酶報告基因適用場景類似。具體的應用場景包括而不局限于以下內容：

圖3 海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒的應用舉例

六、實驗數據

使用海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒與市面上同類產品進行對比實驗，檢測光信號RLU值，本公司產品檢測結果高于同類競品。

七、Q&A

1、檢測的螢光數值很低怎么辦？

1）可能為轉染效率低

a.優化轉染實驗條件，用較易轉染的質粒做陽性對照（如轉染過表達螢光蛋白質粒）；
b.確保轉染DNA的質量，可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對DNA質量進行鑒定；
c.選擇活性較高，處于指數分裂期的細胞進行轉染。

2）可能為啟動子活性低或誘導失敗
a.轉染后的細胞培養使用特異性誘導啟動子的條件；
b.優化細胞的培養條件，提高螢光素酶的表達量；
c.更換強啟動子（如SV40、CMV）。

3）樣品裂解效率低
a.細胞培養時間不宜過長，12-36h內最好，長時間培養后，細胞可能會難裂解。
b.加入的裂解液需足量，保證細胞能夠充分裂解。

4）檢測過程操作不規范
a.選擇合適的檢測儀器，能夠檢測化學發光或者生物發光的儀器都適用于該實驗；
b.需加入足量底物，保證底物的飽和，否則會造成檢測結果出現很大偏差；
c.室溫反應。反應時各個組分（細胞裂解產物，底物工作液等）都需要調整到室溫；
d.螢光素酶的半衰期一般約30min，加完底物后可立即檢測，盡量在30min內完成。

5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，螢火蟲螢光素酶底物-20℃保存；海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存；
b.反應工作液建議現用現配。

2、進行檢測的過程中，螢光信號值太高該如何進行調整？

1）減少質粒轉染量；
2）細胞樣品裂解后，離心取上清后檢測或對裂解產物進行稀釋后檢測。

注：不建議通過減少底物量來降低螢光值，需要保證底物的飽和來反映螢光素酶真實的表達水平，否則會造成檢測結果出現大的偏差。

八、注意事項

1、使用前請將產品瞬時離心至管底，再進行后續實驗。
2、由于溫度對酶反應有影響，所以測定時，樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。
3、海腎螢光素酶催化的生物發光的MAX波長為480 nm，為防止孔間干擾，建議使用白色不透光孔板。

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