類器官免疫熒光整體染色法

更新時間：2023-11-03 點擊次數：1078

一、類器官收集及洗滌

1、類器官收集

移液器吸去培養基，每孔添加1-2mL左右4℃類器官傳代培養緩沖液(abs9730)，輕柔吹打基質膠，收集在15mL離心管中（24孔板，每5孔為一組），加類器官傳代緩沖液定容至10mL（緩沖液越多，基質膠被稀釋的越充分，越容易去除），4℃靜置10min或-20℃放置5min（目的是使基質膠軟化，如果冰箱保溫效果強，冷凍3min），300g 4℃，離心5min棄上清。

2、類器官清洗

添加1mL類器官傳代培養緩沖液重懸，300g 4℃，離心5min棄上清。

二、類器官免疫熒光染色

1）4%多聚甲醛固定15min，PBS洗3次，每次2min；

2）0.5%Triton透膜20min，PBS洗3次，每次2min；（如果需檢測的目的蛋白屬于胞內蛋白或者抗原抗體結合位點位于胞內的跨膜蛋白，抗體孵育前需進行透膜處理）

3）1%BSA室溫封閉60min，PBS洗3次，每次2min；
4）5%BSA稀釋的一抗，4℃孵育過夜，PBS洗3次，每次2min；
5）5%BSA稀釋的TRITC標記的二抗，室溫避光孵育1h，PBS洗3次，每次2min；
6）5ug/mLDAPI避光孵育15min，PBS洗3次，每次2min；
7）將類器官輕柔鋪在載玻片上，吸水紙輕輕吸取多余殘留液體；
8）指甲油封片輕柔固定，于激光掃描共聚焦熒光顯微鏡下觀察并拍攝圖片。

注：PBS清洗時，可用槍頭輕輕吹起避免氣泡，待類器官沉淀到底部開始下一步操作。

本期小愛推薦：

貨號	品名	規格
abs9495	基質膠（低因子、無酚紅）	1.5ml4/1.5ml8
abs9730	類器官傳代培養緩沖液	250mL
abs9444	Organotial人肝癌類器官培養基試劑盒	1kit
abs9445	Organotial人結直腸癌類器官培養基試劑盒	1kit
abs9443	Organotial人肺癌類器官培養基試劑盒	1kit
abs9449	Organotial人胃癌類器官培養基試劑盒	1kit
abs9447	Organotial人胰腺癌類器官培養基試劑盒	1kit
abs9589	Organotial人鼻咽癌類器官培養基試劑盒	1kit
abs9739	Organotial人腦膠質瘤類器官培養基試劑盒	1kit
abs9446	Organotial人乳腺癌類器官培養基試劑盒	1kit
abs9514	Organotial小鼠正常腸類器官培養基試劑盒	1kit
abs9516	Organotial小鼠正常肝類器官培養基試劑盒	1kit
abs9515	Organotial小鼠正常肺類器官培養基試劑盒	1kit
abs9643	Organotial小鼠正常胃類器官培養基試劑盒	1kit
abs9583	Organotial豬子宮內膜類器官培養基試劑盒	1kit
abs9591	Organotial奶牛乳腺類器官培養基試劑盒	1kit

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