抗體選擇全指南之抗體小知識

在實(shí)驗(yàn)室常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中，抗體是不ke或缺的試劑之一。合適的抗體能提高我們的工作效率，節(jié)約時(shí)間。一旦抗體選得不合適，可能會(huì)事倍功半，甚至導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。到底怎樣才能選到合適的抗體呢？小愛特地推出《抗體選擇zui全指南》專題，專題會(huì)包含五篇文章：抗體小知識、抗體選擇的基本原則、WB抗體如何選擇、IHC/ICC/IF抗體如何選擇以及質(zhì)譜流式(CytoF)抗體如何選擇，幫助大家梳理一下抗體選擇的知識和技巧，今天給大家?guī)淼谝黄嚎贵w小知識。

抗體的結(jié)構(gòu)

抗體以一個(gè)或者多個(gè)Y字形單體存在，每個(gè)Y字形單體由4條多肽鏈組成，包含兩條分子量較大的重鏈(Heavy chain，H)和兩條分子量較小的輕鏈(Light chain，L)。重鏈包含1個(gè)可變區(qū)(VH)和3個(gè)恒定區(qū)(CH)，輕鏈包含1個(gè)可變區(qū)(CH)和1個(gè)恒定區(qū)(CL)。相鄰的重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)形成抗原結(jié)合位點(diǎn)。Fc段可以直接結(jié)合酶或者熒光染料，是結(jié)合二抗、補(bǔ)體以及Fc受體的區(qū)域。

圖 抗體的結(jié)構(gòu) (圖片來源于優(yōu)寧維網(wǎng)站)

抗體的同種型

抗體根據(jù)重鏈的不同，可分為IgA、IgD、IgE、IgG和IgM五種類型。同一類免疫球蛋白根據(jù)其鉸鏈區(qū)氨基酸組成和重鏈二硫鍵的數(shù)目和位置的差別，又可分為不同的亞類。IgG可分為IgG1～I(xiàn)gG4；IgA可分為IgA1和IgA2。IgM、IgD和IgE尚未發(fā)現(xiàn)有亞類。

添加抗體五種類型

（圖片來源于優(yōu)寧維網(wǎng)站）

多抗、單抗和重組抗體

抗原可以引起機(jī)體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu)叫做抗原決定簇，也稱為抗原表位。一個(gè)抗原可以有多種不同的抗原決定簇，機(jī)體也可以相應(yīng)產(chǎn)生不同的抗體。按照生產(chǎn)抗體的技術(shù)不同，抗體可分為多克隆抗體、單克隆抗體和重組抗體。

最先出現(xiàn)的是多克隆抗體（polyclonal antibody，簡稱pAb），它是用抗原免疫高等脊椎動(dòng)物，比如兔、山羊等得到的。多抗可識別多個(gè)抗原，它的優(yōu)勢是制備簡單，成本較低，靈敏度也高；但是這種制備方法每次都要使用動(dòng)物，批間差會(huì)比較大，非特異性背景一般相對較高，不過這也不是絕對的，也有一部分多抗很好用。

單克隆抗體（monoclonal antibody，簡稱mAb）是第二代抗體，它是用雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的抗體，只識別抗原的一個(gè)特定表位，相對多抗來說特異性更高，背景更低。最開始只有小鼠單抗，最近幾年兔單抗興起，總體而言，兔單抗較鼠單抗有更高的特異性和靈敏度，親和力更強(qiáng)，而且識別抗原表位更豐富，包括短肽，小分子，點(diǎn)突變以及翻譯后修飾(PTMs)等。

（圖片來源于優(yōu)寧維網(wǎng)站）

最新的第三代抗體是重組抗體(recombinant antibody)，重組抗體的最大特點(diǎn)是編碼抗體蛋白質(zhì)的氨基酸或DNA序列是已知的。通過重組DNA等技術(shù)，將編碼重組抗體的基因序列插入至表達(dá)載體，并將它轉(zhuǎn)入至表達(dá)宿主中（如哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母或細(xì)菌），進(jìn)而表達(dá)純化獲得。它的優(yōu)勢是批間差異極低，特異性更高，生產(chǎn)時(shí)間更短，但是相對來說需要更高的技術(shù)，開發(fā)和生產(chǎn)的成本也比較高。

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抗體的分子形式

圖 抗體的分子形式 (圖片來源于優(yōu)寧維網(wǎng)站)

Fab和Fc片段：木瓜蛋白酶對抗體進(jìn)行消化，會(huì)形成兩個(gè)Fab（抗原結(jié)合）片段和一個(gè)Fc片段。

F(ab’)2片段：胃蛋白酶對抗體進(jìn)行消化，會(huì)形成F(ab’)2片段包含兩個(gè)Fab和鉸鏈。

學(xué)后自測題

1、Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb這個(gè)抗體的名稱中，Ser473及mAb代表什么意思？

答案：Ser473是抗體檢測的磷酸化位點(diǎn)，mAb代表單抗

2、Goat anti-Mouse IgG(H+L)-HRP Antibody這個(gè)抗體名稱中，H+L代表什么意思？

答案：H代表Heavy chain即重鏈，L代表Light chain即輕鏈，H+L代表這個(gè)抗體能識別小鼠IgG的整個(gè)分子。

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...