全國服務咨詢熱線:

                article技術文章
                首頁 > 技術文章 > 細胞活性檢測 | 揭秘細胞活力的六大常用方法

                細胞活性檢測 | 揭秘細胞活力的六大常用方法

                更新時間:2024-09-11      點擊次數:127

                在生物醫學研究的廣闊領域中,細胞活性檢測扮演著至關重要的角色。它不僅幫助科學家們評估細胞的生存狀態,還能深入了解細胞對藥物、環境變化或病理過程的響應。細胞活性檢測通常包括測量細胞增殖、細胞毒性和細胞死亡等方面。今天,小愛向大家介紹細胞活性檢測的六大常用方法:ATP生物發光法、LDH檢測法、MTT比色法、CCK-8法、熒光染料法和細胞凋亡檢測法,一起揭秘細胞活力的科學奧秘。

                 

                1、ATP生物發光法

                 

                細胞內ATP(腺苷三磷酸)的含量是細胞能量代謝的直接指標。ATP生物發光法通過測量細胞內ATP的水平來評估細胞活性。這種方法具有高靈敏度和寬動態范圍,尤其適合于需要高靈敏度檢測的實驗。

                 

                圖1 ATP檢測試劑盒(abs580117)檢測細胞活性的原理圖

                 

                ATP生物發光法的主要原理是在有氧環境下,熒光素在熒光素酶和Mg2+的催化作用下與ATP發生反應,生成熒光素-AMP復合體并釋放出焦磷酸(PPi)。隨后,熒光素-AMP復合體在O2的作用下進一步生成氧化熒光素,同時釋放出CO2和H2O。在這個過程中,激發態的氧化熒光素返回到基態時會發出光子,光子的數量與ATP含量成正比,因此可以通過測量光強度來定量ATP的含量。

                 

                2、LDH檢測法

                乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase, LDH)是一種廣泛存在于細胞中的酶,它在糖酵解途徑中起著關鍵作用,能夠催化乳酸和丙酮酸之間的可逆反應。LDH催化乳酸產生丙酮酸,丙酮酸與 2,4-二硝基ben肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,后者在堿性溶液中呈棕紅色,顏色的深淺與丙酮酸的濃度呈正比,通過測定OD值,可計算LDH的活力。在細胞活性檢測中,LDH的釋放通常被用作細胞膜完整性的指標。當細胞膜受損時,細胞內的LDH會釋放到培養基中,通過測定培養基中LDH的活性,可以評估細胞的損傷或死亡程度。

                 

                3、MTT比色法

                MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物)比色法是一種經典的細胞活性檢測方法。它通過測量活細胞中脫氫酶的活性,將MTT還原成紫色的甲瓚產物,從而間接反映細胞的代謝活性。這種方法操作簡單,成本低廉,是實驗室中常用的篩選工具。

                 

                4、CCK-8法

                CCK-8(Cell Counting Kit-8)法是一種基于WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺苯基)-2H-四唑單鈉鹽)的比色方法。它通過測量細胞線粒體脫氫酶的活性來評估細胞活性。CCK-8法具有較高的靈敏度和較寬的動態范圍,適合于各種細胞類型的活性檢測。

                 

                5、熒光染料法

                熒光染料法利用特定的熒光染料,如Calcein-AM或CFSE,來標記活細胞。這些染料在活細胞內被代謝成熒光產物,通過流式細胞儀或熒光顯微鏡進行檢測。熒光染料法可以提供直觀的細胞活力圖像,適用于細胞增殖和遷移研究。

                 

                6、細胞凋亡檢測

                細胞凋亡是細胞程序性死亡的過程,與細胞活性密切相關。通過Annexin V和PI(碘化丙啶)染色,可以檢測細胞表面的磷脂酰絲氨酸外化,從而評估細胞凋亡的程度。這種方法對于研究細胞死亡機制和藥物毒性具有重要意義。

                 

                細胞活性檢測六大常用方法優缺點比較


                檢測方法

                優點

                缺點

                ATP生物發光法

                靈敏度高,能快速檢測細胞活性,操作簡便,直接反映細胞的代謝活性,與細胞數量成正比。

                可能受到樣品中其他ATP來源的干擾,如微生物污染。

                LDH檢測法

                比色法操作簡便快速,標準曲線法精確定量,靈敏度高,適用于多種細胞類型,反映細胞膜完整性,也可以用來評估細胞毒性。

                可能受到樣品中其他LDH來源的干擾,如微生物污染。只能反映細胞死亡,不能直接反映細胞增殖。

                MTT比色法

                成本較低,操作簡單,適用于多種細胞類型。能夠反映細胞的代謝活性,尤其是線粒體的活性。

                需要活細胞參與,死亡細胞無法進行檢測。

                需要較長的孵育時間,實驗周期較長。

                CCK-8法

                操作簡便,靈敏度高。適用于各種細胞類型,包括懸浮細胞。能夠反映細胞增殖和活力。

                相對于MTT,CCK-8的成本可能較高。對某些細胞類型可能存在毒性。

                熒光染料法

                可以實時監測細胞活性,適合長時間跟蹤實驗。如Calcein-AM可以被活細胞中的酯酶切割產生熒光,從而指示細胞活性。

                熒光染料可能對細胞有一定的毒性,尤其是在高濃度或長時間染色時。此外,熒光信號可能會受到光漂白的影響。

                細胞凋亡檢測法

                可以特異性地檢測細胞凋亡,如通過Annexin V和PI染色,可以區分早期和晚期凋亡細胞。

                需要特定的試劑和設備,如流式細胞儀,操作相對復雜,成本較高。




                 

                每種方法都有其特定的應用場景和限制,選擇合適的檢測方法需要根據實驗的具體需求和條件來決定。

                 

                下面小愛著重為大家介紹具有高靈敏度、操作簡便、快速等優點的ATP檢測法。

                 

                ATP檢測試劑盒(abs580117)使用方法

                 

                一、產品組成


                組分

                規格

                ATP Assay Buffer

                50mL

                D-luciferin

                120μL

                Cofactor

                120μL

                Luciferase

                120μL

                ATP Standard (100μM)

                200μL

                說明書

                1份




                 

                二、使用方法

                 

                1、需自備的試劑和器材

                1)細胞培養用pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS)

                2)Triton X-100

                3)系列可調節量程移液器及吸頭

                4)離心管及白色96孔板

                5)化學發光酶標儀

                 

                2、實驗前準備

                 

                1)樣品準備:

                ①細胞培養上清的準備:將需要測定的細胞接種到培養板中,經過干預因素處理后,直接吸取細胞上清,如果是懸浮細胞,4℃、300g離心5min,收集上清。

                ②細胞裂解上清的準備:將需要測定的細胞(1×106-1×107)收集到5mL的離心管中,4℃、300g離心5min,棄去上清,然后加入200μL含0.1%Triton X-100的PBS,冰浴裂解30min,4℃、10000g離心10min,收集上清。

                ③組織裂解上清的準備:將需要測定的組織(20-50mg)收集到玻璃勻漿器或自動勻漿管中,然后加入500μL含1%Triton X-100的PBS,勻漿1min,4℃、10000g離心10min,收集上清。

                注:各種樣品,如果不立即進行測定,請凍存于-80℃;正式測定前根據預實驗結果,利用ATP Assay Buffer將樣品適當稀釋后進行測定。

                 

                2)標準品的準備:

                在1.5mL離心管中,加入990μL ATP Assay Buffer,再取10μL的100μM濃度ATP Standard加入離心管中配制1μM濃度ATP Standard;然后取另外8根1.5mL離心管,分別加入200μL ATP Assay Buffer,再吸取200μL的1μM濃度ATP Standard依次倍比稀釋為0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0312、0.0156、0.0078、0.0039μM濃度。

                 

                3)檢測工作液的準備:

                ATP檢測工作液的配制:根據待測樣品數參考下表配制適當量的ATP檢測工作液,表中試劑按比例混合后即為ATP檢測工作液。

                 

                 樣品組分

                1個樣品

                10個樣品

                100個樣品

                ATP Assay Buffer

                47μL

                470μL

                4.7mL

                D-luciferin

                1μL

                10μL

                100μL

                Cofactor

                1μL

                10μL

                100μL

                Luciferase

                1μL

                10μL

                100μL









                3、操作步驟

                1)在白色96孔板中設置空白對照孔、標準品孔和樣品孔,參考下表,在空白對照孔中加入50μL ATP Assay Buffer,在標準品孔中加入50μL梯度濃度ATP 檢測工作液(0.0039-1μM),在樣品孔中加入50 μL樣品。

                 

                 

                空白對照孔

                標準品孔

                樣品孔

                ATP Assay Buffer

                50μL

                ——

                ——

                ATP Standard

                ——

                50μL

                ——

                樣品

                ——

                ——

                50μL

                ATP檢測工作液

                50μL

                50μL

                50μL







                2)如上表所示,各孔加入50μL的ATP檢測工作液,混勻,室溫孵育5min。

                3)待反應完成后,利用化學發光酶標儀測定相對發光強度(RLU)。

                4)計算結果:利用標準品濃度為橫坐標,RLU值為縱坐標制作標準曲線,并獲得橫縱坐標之間的函數關系式,然后利用各樣品的RLU值計算樣品中ATP濃度。ATP標曲測定如下圖所示:

                 

                 

                細胞活性檢測是連接基礎研究與臨床應用的橋梁。通過上述六種常用方法,研究人員可以更準確地評估細胞的生存狀態,為疾病治療和藥物開發提供重要信息。隨著生物技術的不斷進步,未來可能會有更多創新的檢測方法問世,為我們揭示細胞活力的更多奧秘。

                 

                本期產品推薦:


                貨號

                產品名稱

                規格

                abs580117

                ATP檢測試劑盒

                96T

                abs580007

                乳酸脫氫酶檢測試劑盒

                96T

                abs50010

                MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

                500T

                abs50003

                CCK-8試劑盒

                500T

                abs42014734

                鈣黃綠素-AM

                1mg

                abs9106

                CFSE

                50mg

                abs50001

                Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒

                100T





                細胞染色產品推薦:


                貨號

                產品名稱

                λEx/λEm (nm)

                產品描述

                abs45153674

                DiO 高氯酸鹽(綠色)

                484/501

                活細胞示蹤、細胞膜染色

                abs47048165

                DiD 對氯苯磺酸鹽(紅色)

                644/663

                活細胞示蹤、細胞膜染色

                abs80001

                霍亂毒素B亞單位(CTB)

                神經示蹤劑

                abs80003

                霍亂毒素B亞單位-FITC

                494/520

                神經示蹤劑

                abs45153692

                DiR 碘化物(深紅色)

                748/780

                動物活體成像

                abs42075819

                D-熒光素鉀鹽

                動物活體成像

                abs47048270

                羅丹明標記鬼筆環肽(橙紅)

                540/565

                細胞骨架染色(F-action)

                abs47048271

                鬼筆環肽-Fluor 488(綠色)

                493/517

                細胞骨架染色(F-action)

                abs47048272

                鬼筆環肽-Fluor 555(橙紅)

                556/574

                細胞骨架染色(F-action)

                abs47014944

                鈣黃綠素紅(紅色)

                560/574

                細胞質染色

                abs9106

                CFSE(綠色)

                492/517

                細胞質染色

                abs42006041

                DASPEI

                550/573

                線粒體染色

                abs9103

                JC-1

                585/590

                線粒體膜電位檢測

                abs47038870

                溶酶體綠色熒光探針

                504/511

                溶酶體染色

                abs47038871

                溶酶體紅色熒光探針

                577/590

                溶酶體染色

                abs9819

                PKH26紅色熒光細胞連接試劑盒

                551/567

                外泌體染色

                abs9820

                PKH67綠色熒光細胞連接試劑盒

                490/502

                外泌體染色

                abs47038874

                內質網綠色熒光探針

                489/520

                內質網染色

                abs47038875

                內質網紅色熒光探針

                587/615

                內質網染色

                abs47047616

                DAPI染色液(藍色)

                364/454

                細胞核染色

                abs813337

                Hoechst 33342(藍色)

                350/461

                細胞核染色

                abs9104

                7-AAD(紅色)

                545/650

                細胞核染色

                abs9358

                PI染色液(紅色)

                535/617

                細胞核染色

                abs45153639

                Fluo 3-AM

                506/526

                鈣離子(Ca2+)探針

                abs42197174

                DCFH-DA

                502/523

                活性氧(ROS)探針

                abs42016243

                DAF-2 DA

                491/513

                一氧化氮(NO)探針

                abs47044989

                WSP-1

                465/515

                硫化氫(H2S)探針





                Absin產品線:

                爆款產品:試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測);細胞培養(類器官試劑盒+基質膠,胎牛血清+培養添加劑+細胞因子)、分化試劑盒;分子(mRNA合成服務+提取試劑盒);化合物大包裝;輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

                特色產品:雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

                愛必信(上海)生物科技有限公司
                地址:上海市浦東新區新浩路58號申江科創園18棟
                郵箱:wulan@absin.cn
                傳真:
                關注我們
                歡迎您關注我們的微信公眾號了解更多信息:
                歡迎您關注我們的微信公眾號
                了解更多信息
                主站蜘蛛池模板: 国产精品俺来也在线观看| 日本成本人视频| 久久精品成人一区二区三区| 人文艺术欣赏ppt404| 国产成人无码av片在线观看不卡| 好男人好视频手机在线| 束缚强制gc震动调教视频| 精品国产电影久久九九| 韩国一区二区视频| 美女脱了内裤张开腿让男人桶网站| 窝窝视频成人影院午夜在线| 一级做a爰片久久免费| 久久国产精品一国产精品| 亚洲欧美精品成人久久91| 又爽又黄又无遮挡的视频在线观看 | 亚洲制服丝袜中文字幕| 高h辣肉嗨文公交车| 99精品在线免费| 中国国语毛片免费观看视频| 亚洲黄网在线观看| 亚洲欧美四级在线播放| 免费a级黄色毛片| 亚洲妇女水蜜桃av网网站| 久久天天躁狠狠躁夜夜| www.色中色| 中文字幕一区二区三区乱码| a在线观看网站| 免费在线观看h| 99久久人妻精品免费一区| 欧美色图在线视频| 老司机永久免费视频| 黄色a级免费网站| 精品无人区无码乱码毛片国产| 波多野结衣在线视频观看| 激情综合色综合久久综合| 神马伦理电影看我不卡| 欧美人妻日韩精品| 最近中文字幕完整电影| 成人品视频观看在线| 成人福利视频app| 无人高清视频免费观看在线动漫|