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                HEK293細(xì)胞系培養(yǎng)攻略

                更新時(shí)間:2024-09-14      點(diǎn)擊次數(shù):134

                HEK293細(xì)胞系家族歷史概覽

                 

                1973年科學(xué)家從一個(gè)父母譜系不祥的人類流產(chǎn)胚胎的腎臟中分離出最原始的人胚腎細(xì)胞,即293細(xì)胞(human embryonic kidney (HEK) 293 cell line),該細(xì)胞被轉(zhuǎn)入修改后的5型腺病毒DNA片段,一開(kāi)始轉(zhuǎn)化非常困難,一直到幾個(gè)月后,科學(xué)家得到一個(gè)穩(wěn)定的可以快速生長(zhǎng)的293單克隆細(xì)胞株,自此HEK293誕生。

                 

                HEK293細(xì)胞在細(xì)胞生物學(xué)和生物技術(shù)中的應(yīng)用頻率僅次于第一個(gè)人類細(xì)胞系HeLa,并衍生出數(shù)百種克隆細(xì)胞系。SV40 large T抗原穩(wěn)轉(zhuǎn)入HEK293細(xì)胞而得到HEK293T;將HEK293馴化成能夠懸浮培養(yǎng)并且能夠耐受低鈣離子培養(yǎng)條件而獲得293S;而293F細(xì)胞是一類能夠在無(wú)血清中高表達(dá)蛋白的野生型293細(xì)胞系。

                 

                HEK293家族如此龐大,成員的特點(diǎn)和應(yīng)用也大不相同:

                1)293T細(xì)胞-瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,蛋白表達(dá);

                2)293H/A細(xì)胞-噬菌斑或空斑實(shí)驗(yàn);

                3)293E細(xì)胞-重組蛋白的生產(chǎn);

                4)293F細(xì)胞-慢病毒的生產(chǎn)和293S細(xì)胞-糖基化蛋白的表達(dá)。

                 

                今天主要給大家介紹的是HEK293和HEK293T的細(xì)胞特性以及如何培養(yǎng)。

                 

                圖1 HEK293細(xì)胞系家族歷史概覽

                 

                HEK293細(xì)胞培養(yǎng)攻略

                 

                細(xì)胞特點(diǎn):

                HEK293細(xì)胞既可以貼壁培養(yǎng)也可以懸浮培養(yǎng),細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)時(shí)可能呈扁平狀,懸浮生長(zhǎng)時(shí)則呈圓形。但多數(shù)情況下,這類細(xì)胞采用貼壁的方式進(jìn)行單層培養(yǎng)。HEK293細(xì)胞適應(yīng)酸性環(huán)境,pH值在6.9-7.1時(shí)可順利貼壁生長(zhǎng)。HEK293細(xì)胞的另一生長(zhǎng)特性是貼壁所需時(shí)間長(zhǎng)且貼壁不牢。其在無(wú)Ca2+或含Ca2+培養(yǎng)基中可同樣生長(zhǎng),也可生長(zhǎng)在血清濃度降低的培養(yǎng)基中,另外,HEK293細(xì)胞培養(yǎng)基通常為高葡萄糖細(xì)胞培養(yǎng)基。HEK293細(xì)胞可用于慢病毒包裝生產(chǎn)及滴度測(cè)定,細(xì)胞轉(zhuǎn)染,蛋白表達(dá)驗(yàn)證等試驗(yàn)。

                 

                培養(yǎng)條件(來(lái)自ATCC和中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)/干細(xì)胞庫(kù)):

                溫度:37℃

                CO2:5%

                wan全培養(yǎng)基配方:Eagle's Minimum Essential Medium(EMEM)+10%胎牛血清(ATCC);或DMEM培養(yǎng)基+10%胎牛血清(中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)/干細(xì)胞庫(kù))

                細(xì)胞形態(tài):上皮樣,貼壁生長(zhǎng)

                傳代比例:細(xì)胞融合率達(dá)到80-90%即可傳代,1:6-1:10。購(gòu)買后的初次傳代建議1:2。

                換液頻率:2-3天

                傳代周期:每周

                凍存液配方:細(xì)胞wan全培養(yǎng)液+含5%/8%DMSO(v/v)或商品化凍存液

                 

                圖2 貼壁生長(zhǎng)的HEK293低密度和高密度時(shí)的細(xì)胞照片(來(lái)自ATCC)

                 

                文中部分相關(guān)產(chǎn)品:


                產(chǎn)品名稱

                貨號(hào)

                DMEM高糖培養(yǎng)基(含L-谷氨酰胺,不含丙酮酸鈉,含HEPES)

                abs9499

                DMEM高糖培養(yǎng)基(含L-谷氨酰胺,含丙酮酸鈉,不含HEPES)

                abs9483

                DMEM高糖培養(yǎng)基(含L-谷氨酰胺,含丙酮酸鈉,不含HEPES,不含酚紅)

                abs9276

                胎牛血清(優(yōu)級(jí))

                abs972

                胎牛血清(標(biāo)準(zhǔn)級(jí))

                abs974

                二甲基亞砜(細(xì)胞培養(yǎng)級(jí))

                abs9187-50mL

                無(wú)血清細(xì)胞凍存液(科研級(jí))

                abs9417-100mL




                 

                HEK293T細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)攻略

                 

                細(xì)胞特點(diǎn):

                由HEK293細(xì)胞衍生而來(lái),是SV40 large T抗原穩(wěn)轉(zhuǎn)得到的細(xì)胞株,貼壁不牢。293T細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染,用磷酸鈣、PEI或脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,效率均可達(dá)90%以上。293T細(xì)胞除了可用于各類基因表達(dá)及蛋白生產(chǎn),還可用于高滴度逆轉(zhuǎn)錄病毒及其他病毒生產(chǎn),如腺病毒及其他哺乳動(dòng)物病毒。需要注意的是,由于SV40大T抗原的存在,該細(xì)胞對(duì)G418耐藥,因此在使用該細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)的時(shí)候應(yīng)避免使用G418作為抗性基因篩選。

                 

                培養(yǎng)條件(來(lái)自ATCC和中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)/干細(xì)胞庫(kù)):

                溫度:37℃

                CO2:5%

                wan全培養(yǎng)基配方:DMEM+10%熱滅活胎牛血清+2mM L-glutamine(來(lái)自ATCC);或DMEM+10%胎牛血清+1%Glutamax+1% 100 mM丙酮酸鈉溶液(來(lái)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)/干細(xì)胞庫(kù))。

                注意:該細(xì)胞貼壁能力較弱,培養(yǎng)時(shí)可酌情使用預(yù)鋪0.2%明膠的培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿。

                細(xì)胞形態(tài):上皮樣,貼壁生長(zhǎng)

                傳代比例:細(xì)胞融合率達(dá)到80%即可傳代,細(xì)胞生長(zhǎng)不能過(guò)密,過(guò)密細(xì)胞容易脫落。傳代比例1:3-1:8。

                注意:細(xì)胞傳代過(guò)程中一定要注意吹散細(xì)胞,接種密度不要過(guò)高,否則接種后細(xì)胞聚團(tuán)將很難再吹散,會(huì)形成類似球狀的聚集體貼壁生長(zhǎng),培養(yǎng)條件合適的情況下細(xì)胞會(huì)逐漸攤開(kāi)生長(zhǎng),但若培養(yǎng)條件無(wú)法有效促進(jìn)細(xì)胞貼壁,可能會(huì)長(zhǎng)時(shí)間呈球狀增殖。

                換液頻率:2-3天

                傳代周期:3-4天

                凍存液配方:細(xì)胞wan全培養(yǎng)液+含5%DMSO(v/v)或商品化凍存液

                 

                圖3 貼壁生長(zhǎng)的HEK293T低密度時(shí)的細(xì)胞照片(來(lái)自ATCC)

                 

                文中部分相關(guān)產(chǎn)品:


                產(chǎn)品名稱

                貨號(hào)

                L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液(100×,200mM)

                abs9295

                丙酮酸鈉溶液(100×,100mM)

                abs9296




                 

                HEK293細(xì)胞系培養(yǎng)F&Q

                 

                1、如果發(fā)生293T細(xì)胞不貼壁,漂浮在培養(yǎng)基中的現(xiàn)象,需確認(rèn)所使用的DMEM中碳酸氫鈉濃度及培養(yǎng)箱中CO2濃度。并參考以下培養(yǎng)體系:

                a) DMEM由1.5g/L碳酸氫鈉配制而成,使用5%CO2培養(yǎng)箱。

                b) DMEM由3.7g/L碳酸氫鈉配制而成,使用10%CO2培養(yǎng)箱。

                當(dāng)使用碳酸氫鹽含量高的培養(yǎng)基時(shí),必須將這些細(xì)胞在10%CO2中孵育,以便正確緩沖培養(yǎng)基。當(dāng)培養(yǎng)基沒(méi)有適當(dāng)緩沖時(shí),239T細(xì)胞雖然可以存活,但將無(wú)法粘附并保持漂浮在培養(yǎng)基中。

                 

                2、是否需要使用熱滅活胎牛血清?

                加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在進(jìn)行免疫學(xué)研究、培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。

                 

                好啦,工具細(xì)胞HEK293和HEK293T的培養(yǎng)攻略就到這里啦,大家想要了解更多細(xì)胞培養(yǎng)的小技巧,歡迎一起交流討論。

                 

                Absin產(chǎn)品線:

                爆款產(chǎn)品:試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè));細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒;分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒);化合物大包裝;輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

                特色產(chǎn)品:雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

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