一文了解TR-FRET技術(shù)

什么是TR-FRET？

TR-FRET（Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer，時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移）是一種用于研究分子間相互作用的生物物理技術(shù)。它結(jié)合了兩種技術(shù)：熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)和時(shí)間分辨熒光(TRF，Time-Resolved Fluorescence)。

熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理圖

熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)是一種物理現(xiàn)象，其中一個(gè)熒光分子（供體）在吸收光能后，可以將激發(fā)能量非放射性地傳遞給另一個(gè)分子（受體），如果受體在空間上足夠接近供體（通常在1-10納米范圍內(nèi)）。這種能量轉(zhuǎn)移的效率與供體和受體之間的距離的六次方成反比，因此可以用來(lái)研究分子間的接近程度和相互作用。

時(shí)間分辨熒光原理圖

時(shí)間分辨熒光(TRF)是一種測(cè)量熒光壽命的技術(shù)，它通過(guò)在停止激發(fā)光源后測(cè)量熒光衰減來(lái)區(qū)分短壽命的背景熒光和長(zhǎng)壽命的信號(hào)熒光。這允許在激發(fā)后的一個(gè)特定時(shí)間窗口內(nèi)測(cè)量熒光，從而減少背景干擾，提高信號(hào)的信噪比。

在TR-FRET中，通常使用長(zhǎng)壽命的供體熒光團(tuán)，如鑭系元素（如銪或鋱）的螯合物，這些供體的熒光壽命較長(zhǎng)，可以在激發(fā)后的一個(gè)延遲時(shí)間內(nèi)被檢測(cè)，此時(shí)短壽命的背景熒光已經(jīng)衰減。受體熒光團(tuán)通常是有機(jī)染料或另一種金屬螯合物，其發(fā)射波長(zhǎng)與供體的發(fā)射波長(zhǎng)不同。

TR-FRET能做什么？

受體結(jié)合研究：

例如，研究者可能對(duì)一種新藥如何與心臟藥物靶標(biāo)β-腎上腺素受體結(jié)合感興趣。可以將β-腎上腺素受體標(biāo)記上銪(Eu)作為供體，將藥物分子標(biāo)記上一個(gè)合適的受體熒光團(tuán)。

當(dāng)藥物與受體結(jié)合時(shí)，觀察到的FRET信號(hào)增加，從而可以定量分析藥物的結(jié)合親和力。

酶活性檢測(cè)：

假設(shè)要研究一種新型抑制劑對(duì)酪氨酸激酶活性的影響。可以將激酶的底物標(biāo)記上供體熒光團(tuán)，并將激酶標(biāo)記上受體熒光團(tuán)。在沒(méi)有抑制劑的情況下，激酶會(huì)磷酸化底物，導(dǎo)致兩者分離，F(xiàn)RET信號(hào)減少。添加抑制劑后，如果FRET信號(hào)保持高水平，表明抑制劑阻止了激酶的活性。

蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用：

研究腫瘤抑制蛋白p53與MDM2之間的相互作用。將p53標(biāo)記上供體熒光團(tuán)，將MDM2標(biāo)記上受體熒光團(tuán)。當(dāng)p53與MDM2相互作用時(shí)，F(xiàn)RET信號(hào)增加，可以用來(lái)研究這種相互作用的動(dòng)力學(xué)和調(diào)控機(jī)制。

藥物篩選：

在藥物開發(fā)過(guò)程中，TR-FRET可以用來(lái)高通量篩選化合物庫(kù)，以找到與特定靶標(biāo)結(jié)合的潛在藥物候選物。

例如，通過(guò)將G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)標(biāo)記上供體和受體熒光團(tuán)，可以篩選能夠激活或抑制該受體的化合物。

與ELISA相比，TR-FRET有什么優(yōu)缺點(diǎn)？

abs7311微孔板(384孔板,白色,淺孔)

與ELISA相比，TR-FRET具有以下優(yōu)點(diǎn)：

高靈敏度：TR-FRET技術(shù)利用長(zhǎng)壽命的熒光標(biāo)記（如鑭系元素），可以在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)檢測(cè)到信號(hào)，從而提高檢測(cè)的靈敏度；

高穩(wěn)定性：由于使用了時(shí)間分辨檢測(cè)，可以減少背景噪聲，提高信號(hào)的穩(wěn)定性；

無(wú)需洗滌步驟：TR-FRET實(shí)驗(yàn)通常是均相的，不需要洗滌步驟，簡(jiǎn)化了操作流程；

節(jié)省樣本：TR-FRET搭配96孔板（abs7308微孔板（96孔板，白色，淺孔）或384孔板（abs7311微孔板（384孔板，白色，淺孔），384孔板一般每孔僅需要10uL樣本；

線性范圍廣：可以同時(shí)檢測(cè)高濃度和低濃度的樣品；

快速：TR-FRET實(shí)驗(yàn)通常可以在1h內(nèi)完成，包括信號(hào)的產(chǎn)生和檢測(cè)。

但是由于TR-FRET實(shí)驗(yàn)需要特殊的熒光標(biāo)記和時(shí)間分辨熒光讀板機(jī)(TRF Reader)，這可能比傳統(tǒng)的ELISA成本更高。技術(shù)層面，TR-FRET技術(shù)可能需要更多的技術(shù)知識(shí)和專業(yè)設(shè)備來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析。

absin能為客戶提供的TR-FRET產(chǎn)品有哪些？

除以上提到的96孔和384孔微孔板以外，absin還可以提供Human KRAS & cRAF系列、Human IgG系列、DDB1-CRBN&GSPT1系列的檢測(cè)試劑盒。

1、Human KRAS & cRAF系列

1）省力：無(wú)需洗滌；

2）省時(shí)：僅需1h孵育；

3）省樣本：20uL/孔或更低反應(yīng)體系；

4）高通量：96/384/1536微孔板均可搭配。

數(shù)據(jù)實(shí)例（以abs560004 Human KRAS G12C&cRAF Binding Kit為例）：

以下數(shù)據(jù)不能代替實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)，只作為示例，結(jié)果可能因TR-FRET兼容儀器而異。

2、Human IgG 系列

abs560002 Human Total IgG Kit(Assay Pro) 競(jìng)爭(zhēng)法

abs560011 Human IgG Sandwich Assay Kit 夾心法

數(shù)據(jù)實(shí)例

以下數(shù)據(jù)不能代替實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)，只作為示例，結(jié)果可能因TR-FRET兼容儀器而異。

? abs560002 Human Total IgG Kit(Assay Pro) 競(jìng)爭(zhēng)法

? abs560011 Human IgG Sandwich Assay Kit 夾心法

3、Human DDB1-CRBN&GSPT1系列

用于測(cè)定分子膠CC-885及待檢測(cè)化合物介導(dǎo)的DDB1/CRBN復(fù)合體與GSPT1相互作用。是實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單快速的檢測(cè)能夠介導(dǎo)DDB1/CRBN復(fù)合體與GSPT1相互作用的小分子的高通量方法。

數(shù)據(jù)示例

以下數(shù)據(jù)不能代替實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)，只作為示例，結(jié)果可能因TR-FRET兼容儀器而異。

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...