RNA提取之Trizol法

更新時間：2025-02-07 點擊次數(shù)：446

在分子生物學研究中，RNA提取是非常重要的基礎(chǔ)步驟，而提取效率和純度直接影響后續(xù)實驗的成功。Trizol試劑是一款高效、可靠的核酸提取試劑，為科研人員提供專業(yè)解決方案。

Trizol產(chǎn)品特點：

1、高效提取RNA

Trizol試劑基于經(jīng)典的酸性酚-氯仿分離法，可從細胞、組織、植物等多種樣本中快速提取高純度的RNA。可滿足多種實驗需求，省時高效。

2、高純度

提取的RNA具有較高的純度和完整性，A260/280值通常在1.8-2.0，wan全滿足分子生物學實驗的要求。

3、適用范圍廣

樣本類型：適用于細胞、組織、細菌、酵母和病毒等多種樣本。

下游實驗：提取的核酸可直用于Northern，點雜交，純化mRNA，體外翻譯，RNase protectionassay，cDNA克隆，以及RT-PCR；也可以用于基因表達芯片分析、高通量測序等對RNA質(zhì)量要求較高的實驗，保證結(jié)果的準確性和可靠性。

需要的試劑

試劑名稱	應用
Trizol試劑(abs60154)	裂解樣本
氯仿	離心后分離出上層水相(含RNA)
異丙醇	沉淀RNA
75%乙醇	洗滌沉淀的RNA
DEPC-ddH₂O(abs9259)	溶解RNA

需要的耗材

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
abs7119	1.5mL離心管(無菌無酶)	1箱
abs7118	0.5mL離心管(無菌無酶)	1箱
abs7071	10uL濾芯吸頭(盒裝,無菌無酶)	1箱
abs7074	200uL濾芯吸頭(盒裝,無菌無酶)	1箱
abs7077	1000uL濾芯吸頭(盒裝,無菌無酶)	1箱
abs7176	20uL濾芯吸頭(盒裝,無菌無酶)	1箱
abs7072	10uL吸頭(盒裝,無菌無酶)	1箱
abs7073	10uL吸頭(袋裝,無酶)	1箱
abs7075	200uL吸頭(盒裝,無菌無酶)	1箱
abs7076	200uL吸頭(袋裝,無酶)	1箱
abs7078	1000uL加長吸頭(盒裝,無菌無酶)	1箱
abs7079	1000uL吸頭(盒裝,無菌無酶)	1箱
abs7080	1000uL吸頭(袋裝,無酶)	1箱
abs7081	1000uL加長吸頭(袋裝,無酶)	1箱

操作步驟：

1、細胞裂解

★ 組織樣本

Trizol用量：每50-100mg組織加1mL Trizol，樣品體積不應超過Trizol體積的10％。

（1）將動物或植物組織切成小塊，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理；

（2）將研磨好的組織粉末快速轉(zhuǎn)入裝有1mL Trizol的2mL離心管中，在渦旋振蕩器上迅速振蕩混勻，置于冰上，待所有的樣品研磨完；

（3）裂解產(chǎn)物應呈澄清的透明粘稠液體。對于富含蛋白、脂肪或多糖物質(zhì)的組織樣品如肌肉、脂肪組織和植物結(jié)節(jié)部位等，勻漿后仍會存留有不溶物質(zhì)，可于4℃ 12,000xg離心10min，然后吸取上清至一新的離心管中。

★ 細胞樣本

（1）貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液，每10cm2培養(yǎng)面積（6孔板單孔或35mm平皿）加入1mL Trizol，用加樣器吹打數(shù)次，以確保細胞wan全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中；

注：Trizol的使用量應由培養(yǎng)皿表面積決定，而非由細胞數(shù)目決定。Trizol量不足可能導致提取的RNA中有DNA污染。

（2）懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，每5-10×10⁶動植物或酵母細胞，或每1×10⁷細菌細胞加入1mL Trizol，用加樣器吹打，使其wan全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。

注：添加Trizol前切勿洗滌細胞，以免RNA降解。必要時可以用勻漿器來裂解某些細菌或者酵母細胞。

2、液相分離

（1）裂解產(chǎn)物于室溫放置5min，使核酸-蛋白復合物wan全分離（注：此時樣品可在-80℃長期保存）；

（2）每1mL Trizol加入0.2mL氯仿，蓋緊管蓋，劇烈振蕩15s，室溫放置2-3min；

（3）4℃ 12,000xg離心15min，樣品會分成三層：桔黃色的下層有機相，中間層和無色的上層水相；

（4）吸取含總RNA的上層水相至一新的離心管中，吸取水相的體積為所用Trizol試劑的60％。

3、RNA回收

（1）按照每1mL Trizol的最初使用量加入0.5mL異丙醇，顛倒數(shù)次混勻，室溫放置10min；

（2）4℃ 12,000xg離心10min，棄除上清，可見膠狀的RNA沉淀；

（3）按照每1mL Trizol的最初使用量加入1mL 75%乙醇，顛倒數(shù)次混勻，洗滌沉淀；

（4）4℃ 12,000xg離心5min，棄除上清；

（5）室溫倒置5-10min晾干或真空抽干（不要使用真空干燥離心機，以免RNA過干，難以溶解）；

（6）加入適量（如25uL） DEPC-ddH₂O或TE緩沖液，用加樣器吹打數(shù)次溶解RNA；

（7）通過RNA電泳以及紫外分光光度計檢測，確定RNA的濃度、純度和完整性；

（8）所得的RNA應立即使用或適量分裝后-80℃保存，避免反復凍融。

僅需幾步操作，即可得到高質(zhì)量的RNA，簡便且高效。除Trizol(abs60154)外，Absin還有Trizol（總RNA抽提試劑盒）(abs9331)包含有RNA提取全流程的試劑。

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
abs60154	Trizol	500mL
abs9331	Trizol(總RNA抽提試劑盒)	1kit
abs9259	無酶無菌水	500mL

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...