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                抗體親和純化填料解決方案

                更新時間:2025-02-14      點擊次數:489

                一、背景介紹

                 

                ◆ 蛋白A是???葡萄球菌的細胞壁中的表?蛋?,它由折疊成三螺旋束的五個同源Ig結合域組成;

                ◆ 蛋白G是G、C型鏈球菌細胞壁中的?種蛋?質;

                ◆ 蛋白A/G是重組蛋?A蛋?G融合蛋?,融合了來?蛋?A的5個Fc結合域和蛋?G的3個Fc結合域;

                ◆ 蛋白L來源于?消化鏈球菌,并通過L鏈相互作?與免疫球蛋?結合。

                 

                圖1 抗體與抗體親和配基的作用區域

                 

                表1 蛋白A、G、L的抗體親和性差異分析


                 

                蛋白A

                蛋白G

                蛋白A/G

                蛋白L

                優點

                結合位點在CH2和CH3結構域之間的Fc區域,以及? VH3家族的Fab區內的重鏈

                 

                可以特異性地同免疫球蛋?IgG分?的Fc段結合?不影響其Fab段與抗原分?結合的能?

                可以與?的所有IgG亞型、IgA、IgE、IgM結合。蛋?A/G降低了對pH的依賴,允許在pH 5-8進?結合

                只與抗體的κ輕鏈結合?不會影響抗體的抗原結合位點。可以結合更?泛的抗體類別,如?類的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD,以及含κ輕鏈(?類1,3,4型,??1型)的Fab、scFv等抗體?段

                缺點

                 

                 

                不能與??的IgA、IgM和?清?蛋?結合

                不結合?、??或綿?來源的免疫球蛋?

                應用

                免疫球蛋?的純化、固定或檢測領域

                從?清中分離并純化或去除IgG、單克隆抗體的純化和抗原抗體復合物的分離等

                ?IgG單抗的提取和檢測

                從添加BSA或FCS的培養液中純化單克隆抗體,也?泛?于基因改造?程化抗體的純化分離



                 

                表2 抗體親和配基與不同來源及亞型抗體之間的親和?


                種類

                亞型

                蛋白A

                蛋白G

                蛋白A/G

                蛋白L

                IgG1

                +++

                +++

                +++

                +++

                IgG2

                +++

                +++

                +++

                +++

                IgG3

                +

                +++

                +++

                +++

                IgG4

                +++

                +++

                +++

                +++

                IgM

                +

                -

                +

                +++

                IgD

                -

                -

                -

                +++

                IgA

                +

                -

                +

                +++

                Fab

                +

                +

                +

                +++

                小鼠

                IgG1

                +

                ++

                ++

                +++

                IgG2a

                +++

                +++

                +++

                +++

                IgG2b

                +++

                +++

                +++

                +++

                IgG3

                +++

                +++

                +++

                +++

                IgM

                -

                -

                -

                +++

                大鼠

                IgG1

                +

                ++

                ++

                +++

                IgG2a

                -

                +++

                +++

                +++

                IgG2b

                -

                +

                +

                +++

                IgG2c

                +++

                +++

                +++

                +++

                IgG1

                +

                +++

                +++

                -

                IgG2

                +++

                +++

                +++

                -

                山羊

                IgG1

                +

                +++

                +++

                -

                IgG2

                +++

                +++

                +++

                -

                IgG(ab)

                +

                -

                +

                NA

                IgG(c)

                +

                -

                +

                NA

                IgG(T)

                -

                +++

                +++

                NA

                IgG

                +++

                +++

                +++

                +

                IgG

                +++

                +

                +++

                +++

                IgG

                +++

                +

                +++

                NA

                IgY

                -

                -

                -

                -




                注:- 表示不包含;+ 表示中標組合;+++ 表示錯誤組合;NA 表示不適用或數據不可用。

                 

                二、抗體親和純化填料參數

                 


                類別

                重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF

                重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF

                重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF

                蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF

                重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF

                基質

                4%交聯瓊脂糖

                4%交聯瓊脂糖

                4%交聯瓊脂糖

                4%交聯瓊脂糖

                4%交聯瓊脂糖

                配基

                重組金黃色葡萄球菌蛋白A,≥6mg/mL 

                重組鏈球菌蛋白G,≥6mg/mL,單點偶聯

                重組耐堿蛋白A,≥6mg/mL

                蛋白A蛋白G融合蛋白,≥6mg/mL

                重組大消化鏈球菌蛋白L,≥6 mg/mL

                粒徑范圍a

                45-165μm

                平均粒徑

                ~90μm

                動態結合載量b

                ≥40mg h-IgG/mL

                ≥40mg h-IgG/mL

                ≥45mg h-IgG/mL

                ≥40mg h-IgG/mL

                ≥40mg k輕鏈h-IgG/mL

                推薦工作流速c

                60-300cm/h

                60-300cm/h

                60-300cm/h

                60-150cm/h

                60-300cm/h

                最大流速與壓力d

                >900cm/h

                使用 pH

                3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩定)

                3-9(推薦的工作pH),2-10(短期穩定)

                3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩定)

                3-10(推薦的工作pH),3-12(短期穩定)

                2-9(推薦的工作pH),15mM NaOH(CIP)

                化學穩定性

                在以下溶液中穩定:常用的水相緩沖液、10-100mmol/L NaOH、6mol/L鹽酸胍、70%乙醇。

                在以下溶液中穩定:常用的水相緩沖液、6mol/L鹽酸胍、70%乙醇。

                在以下溶液中穩定:常用的水相緩沖液、0.1-0.5mol/L氫氧化鈉、6 mol/L鹽酸胍、70%乙醇等。

                在以下溶液中穩定:常用的水相緩沖液、0.1-0.5mol/L氫氧化鈉、6mol/L 鹽酸胍、70%乙醇等。

                在以下溶液中穩定:常用的水相緩沖液、6mol/L鹽酸胍、70% 乙醇。




                 

                注:

                a:90%體積以上的微球在此粒徑范圍;

                b:DBC10%測試條件為:10%流穿,6min停留時間;

                c:推薦流速是指該流速可滿足大部分柱高下2-6min停留時間的使用條件,并非只能在該流速范圍內工作;

                d:10cm柱高下的最大測試流速。

                 

                三、應用數據

                 

                圖2 工藝溶劑穩定性

                 

                圖3 不同蛋?A填料對NaOH的耐受性

                 

                圖4 不同蛋?G填料的洗脫曲線,樣品為h-IgG

                 

                圖5 填料:重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)(Cat: abs91003-M);

                樣品:牛血清,相對于填料約20mg IgG/mL填料;

                上樣、結合緩沖液: 20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4, 10CV;

                洗脫緩沖液:100mM甘氨酸,pH3.0,14CV;

                在位清洗(CIP):100mM NaOH,10CV

                 

                四、愛必信抗體親和純化填料產品信息

                 


                貨號

                產品名稱

                規格

                abs91001-F

                重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF

                10mL/100mL

                abs91001-G

                重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱)

                1mL/5mL

                abs91001-M

                重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)

                1mL/5mL

                abs91002-F

                重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF

                10mL/100mL

                abs91002-G

                重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱)

                1mL/5mL

                abs91002-M

                重組蛋白G瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)

                1mL/5mL

                abs91003-F

                重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF

                10mL/100mL

                abs91003-M

                重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)

                1mL/5mL

                abs91003-G

                重耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱)

                1mL/5mL

                abs91004-F

                蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF

                10mL/100mL

                abs91004-M

                蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)

                1mL/5mL

                abs91004-G

                蛋白A/G瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱)

                1mL/5mL

                abs91005-F

                易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF

                10mL/100mL

                abs91005-M

                易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)

                1mL/5mL

                abs91005-G

                易洗脫蛋白G瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱)

                1mL/5mL

                abs91006-F

                重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF

                10mL/100mL

                abs91006-M

                重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF(中壓預裝柱)

                1mL/5mL

                abs91006-G

                重組蛋白L瓊脂糖凝膠FF(重力預裝柱)

                1mL/5mL




                 

                參考文獻

                [1] Arora S, Saxena V, Ayyar BV. Affinity chromatography: A versatile technique for antibody purification. Methods. 2017 Mar 1;116:84-94. doi: 10.1016/j.ymeth.2016.12.010. Epub 2016 Dec 22. PMID: 28012937.

                 

                Absin產品線:

                爆款產品:試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測);細胞培養(類器官試劑盒+基質膠,胎牛血清+培養添加劑+細胞因子)、分化試劑盒;分子(mRNA合成服務+提取試劑盒);化合物大包裝;輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...

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