LNP遞送mRNA，轉染So easy！

更新時間：2025-03-21 點擊次數：293

背景介紹

裸露的RNA是帶負電荷的親水性大分子，因為細胞膜的靜電排斥，難以進入細胞，且易被無處不在的RNA酶快速降解，所以需要保護性外殼才能進入細胞。細胞膜的組成主要是脂質，利用脂質囊泡包封RNA穿過細胞膜并將RNA釋放到細胞質中。囊泡應該是一種帶正電的脂質，才能夠結合帶負電的RNA。

然而，由永jiu性陽離子脂質組成的囊泡由于能與帶負電的細胞膜發生靜電作用而引起細胞毒性，脂質結構才能夠對內體酸性環境響應而帶正電荷的分子。

脂質納米粒結構

LNP通常由四種關鍵成分組成：可離子化的陽離子脂質、磷脂（兩性離子脂質）(PL)、膽固醇和PEG化脂質。

脂質納米粒遞送機制

脂質納米粒(LNP)作為mRNA的傳遞系統，其作用機制涉及多個步驟，確保mRNA安全有效地遞送到目標細胞并表達蛋白。在LNP中，可電離的陽離子脂質發揮著重要作用，因為它可以帶正電荷低于其Ka以介導在自組裝成LNP期間負載帶負電荷的RNA，在中性pH下不帶電以最大限度地減少毒性，并在細胞吸收后再次帶正電荷以促進內體逃逸隨著內體pH降低。膽固醇和PEG脂質的變體已被證明可以調節LNP物理性質、納米結構和最終功效。兩性離子磷脂通常被稱為“輔助脂質"。LNPs在保護mRNA、促進細胞內傳遞、以及激活免疫反應方面發揮關鍵作用。

LNP轉染實驗步驟

下述轉染步驟中為6孔板單孔參考條件。對于其他培養形式，請參考表1。

1、mRNA 預混液制備

將2.5ug mRNA（濃度為1ug/uL）與60uL Buffer混合。

2、mRNA-easyLNP復合物

將62.5uL mRNA預混液與62.5uL easyLNP納米混懸液混合，渦旋2-3s，混勻。

3、加入細胞

將125uL mRNA-easyLNP復合物加入細胞，輕輕晃動使均勻分散。

4、分析時間

培養24-48h后分析。

表1 根據每孔使用的細胞培養容器的mRNA轉染指南

mRNA細胞轉染步驟	試劑	96孔板	24孔板	6孔板
（1）40ng/μL mRNA預混液制備	Buffer(以mRNA原液濃度1μg/μL為例)	2.4μL	12μL	60μL
（1）40ng/μL mRNA預混液制備	mRNA	0.1μg	0.5μg	2.5μg
（2）mRNA-easyLNP復合物制備	easyLNP納米混懸液	2.5μL	12.5μL	62.5μL
（2）mRNA-easyLNP復合物制備	mRNA預混液	2.5μL	12.5μL	62.5μL
（3）加入細胞	mRNA-easyLNP復合物	5μL	25μL	125μL

實驗示意圖：

產品推薦：

轉染方式	貨號	品名	規格
細胞	abs60339	mRNA轉染試劑	1mL
	abs60620	easyLNP™ mRNA免疫細胞轉染試劑盒	1.5mL/3mL/5mL
	abs60621	easyLNP™ Plus通用型RNA細胞轉染試劑盒	1.5mL/3mL/5mL
	abs60322	Lipofect5000質粒轉染試劑	0.5mL/1.0mL
	abs60255	質粒DNA轉染試劑盒(貼壁細胞)	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60256	PM原代細胞質粒DNA轉染試劑盒	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60327	SP懸浮細胞質粒DNA轉染試劑盒	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60369	RF 293細胞DNA轉染試劑盒	0.5mL/1.5mL
	abs60259	核酸轉染試劑盒	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60324	PM原代細胞核酸轉染試劑盒	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60325	SP懸浮細胞核酸轉染試劑盒	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60252	小核酸轉染試劑	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60253	PM原代細胞小核酸轉染試劑	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60254	SP懸浮細胞小核酸轉染試劑	0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs60317	核酸共轉染試劑	0.5mL/1.0mL/1.5mL
	abs7993	50nm磁轉染試劑	100uL
轉染增強劑	abs42025397	聚凝胺溶液	1mL
	abs42085824	海美溴銨	5g
	abs42085198	魚精蛋白硫酸鹽	5g/25g
動物體內	abs60622	easyLNP™ mRNA體內轉染試劑盒(全身作用)	0.3mL/0.5mL/1mL
動物體內	abs60623	easyLNP™ mRNA體內轉染試劑盒(局部作用)	0.3mL/0.5mL/1mL
核酸轉染(動物體內)	abs60258	Elite Fect-I小核酸活體組織轉染試劑(小鼠轉染)	3只/6只

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