ELISA檢測之激素水平

ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，酶聯免疫吸附測定）是一種基于抗原-抗體特異性結合的免疫學檢測技術，利用酶標記的抗體或抗原，通過酶催化的顯色反應檢測目標分子（如蛋白質、抗體、激素等）的存在和含量。

基本原理：

1、抗原-抗體特異性結合：利用抗體識別特定抗原，或抗原結合特定抗體?？梢苑譃橹苯臃?、間接法、夾心法、競爭法；

2、酶標記和顯色反應：結合特定酶（如辣根過氧化物酶HRP或堿性磷酸酶AP），通過底物反應產生可檢測的顏色變化；

3、定量分析：通過比色法測定光吸收值，與標準曲線比較，計算待測物的濃度。

檢測激素的ELISA試劑盒類型

樣本處理：

血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或 4℃過夜，然后 1000×g離心 20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

血漿：用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于 2-8℃1000×g離心 15 分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃℃保存，但應避免反復凍融。

組織勻漿：用預冷的 PBS （0.01M,pH=7.4）沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織碎。將碎的組織與對應體積的 PBS（一般按 1：9 的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對應 9mL 的 PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于 5000×g離心 5~10 分鐘，取上清檢測。

細胞裂解液：貼壁細胞用預冷 PBS 輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g 離心 5 分鐘后收集細胞；懸浮細胞可直接離心收集。收集的細胞用預冷PBS 清洗 3 次，每 1×10^6 個細胞中加入 150-200uL PBS 重懸（推薦在PBS 中加入蛋白酶抑制劑；若含量很低可適當減少 PBS 體積）并通過反復凍融或超聲使細胞破碎。將提取液于 2-8℃，1500×g 離心 10 分鐘，取上清檢測。

細胞培養上清：請 1000×g離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

其它生物液體：1000xg離心 20分鐘，取上清即可檢測。

ELISA試劑盒特點：

1、可測樣本類型多：血清、血漿、組織、細胞培養上清等樣本；

2、高準確度：回收率普遍在90%-115%之間；

3、高靈敏度：靈敏度達pg級別，R²大于99。

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