蛋白純化磁珠/試劑盒——高效捕獲目標分子

實驗原理

蛋白純化磁珠/試劑盒基于特異性生物分子相互作用實現目標分子的精準捕獲與純化。磁珠表面修飾有高親和力的配體（如抗體、鏈霉親和素、His標簽結合基團等），可與目標蛋白特異性結合。例如，抗體偶聯磁珠通過抗原-抗體結合原理選擇性吸附目標蛋白，而鏈霉親和素磁珠則利用生物素-親和素的高親和力捕獲生物素化分子。

結合后，通過磁力分離技術快速將磁珠-目標分子復合物與雜質分離，再經洗滌去除非特異性吸附，最終通過改變緩沖液條件（如pH調整、競爭性洗脫）釋放高純度目標產物。該技術兼具高效、溫和、可自動化等優勢，適用于復雜樣本（如血清、細胞裂解液）中微量目標的純化。

實驗步驟（以抗體偶聯磁珠為例）

1、樣本預處理

離心去雜：將樣本（如血清）以3000g離心10分鐘，去除細胞碎片或顆粒物。

裂解（可選） ：若目標為細胞內成分，使用裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑）處理樣本，超聲破碎后離心取上清。

2、磁珠孵育

磁珠活化：渦旋混勻磁珠懸液，取適量磁珠置于離心管中，用預冷PBS洗滌2次以去除儲存液。

結合目標分子：將預處理樣本與磁珠混合，室溫旋轉孵育30分鐘，確保充分接觸。

3、磁分離與洗滌

磁吸去上清：將離心管置于磁力架上靜置2-3分鐘，待溶液澄清后吸棄上清。

洗滌雜質：加入洗滌緩沖液（如含0.1% Tween-20的PBS），輕柔重懸磁珠，重復磁吸步驟2-3次以去除非特異性結合。

4、目標分子洗脫

競爭性或條件洗脫：

酸性洗脫：加入低pH緩沖液（如pH 2.8甘氨酸-HCl），孵育5分鐘，中和后立即轉移上清以保護目標活性。

生物素競爭：對于鏈霉親和素磁珠，加入過量游離生物素競爭性解離目標分子。

磁珠再生（可選） ：部分試劑盒支持磁珠再生，通過去離子水、再生緩沖液處理后可重復使用。

總耗時：約60分鐘，批間差異<5%，回收率可達90%以上。

產品優勢

• 釋放微球，擺脫樣品體積、試劑流速、層析柱壓力和洗脫體積的限制。

• 同時實現固液和液液分離，簡化步驟，減少損耗，節省時間。

• 突破分泌蛋白和包涵體蛋白純化的技術瓶頸。

• 減少對儀器設備的依賴，降低維護和保養成本。

• 操作穩定，便于高通量和大規模蛋白純化。

• 產品性能穩定，批次間差異小。

• 實現高產率、高純度的目標蛋白。

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