紅細胞裂解液，10X

        在生物科研領域，經常需要去除紅細胞。去除紅細胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer 、Tris-氯化銨紅細胞裂解液、Gey's Lysis Buffer 。紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液，其主要有效成分為NH4Cl 。
        愛必信提供的紅細胞裂解液（10X），配方經過優化不同于ACK Lysis Buffer ，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。對于裂解、去除有細胞核紅細胞，例如鳥或禽類的紅細胞，效果不佳，裂解類似細胞時，不建議采用。該裂解液經過濾除菌，為10X 濃縮液，使用本產品處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續的細胞培養、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規的分析和檢測，尤其適用于流式細胞檢測或需要高濃度裂解液的情況。

操作步驟(僅供參考)：
注意：絕大多數情況下，應使用無菌去離子水稀釋紅細胞裂解液(10×)使用，流式細胞術除外。

一、組織細胞樣本的常規操作：
1、制備細胞懸液: 新鮮組織經過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞懸液，離心棄上清。
2、裂解: 加入細胞沉淀體積的紅細胞裂解液，輕柔吹打混勻，裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、離心，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發現紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3各一次。
5、洗滌：根據實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液，輕柔混勻重懸沉淀。離心，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液的量一般應大于細胞沉淀體積的5倍以上。
6、如有必要，重復上述步驟5一次，共洗滌1～2次。
7、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養等后續實驗。

二、組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)：
1、制備細胞懸液：新鮮組織經胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，制備細胞懸液，離心棄上清。
2、裂解：加入1×紅細胞裂解液，輕柔吹打混勻，裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、加入PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液，輕柔混勻。
4、離心，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。
5、如果發現紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2～4各一次。
6、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養等后續實驗。

三、血液樣本的常規操作：
1、取新鮮抗凝血，離心，棄上清。
2、裂解: 加入1×紅細胞裂解液，輕柔吹打混勻，裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。(特別提醒：對于鼠的血液，裂解已經足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間，并且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解。)
3、離心，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發現紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3一次。
5、洗滌: 根據實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液，輕柔混勻重懸沉淀。離心，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液的量一般應大于細胞沉淀體積的5倍以上。
6、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養等后續實驗。
注意：對于微量或少量的血液樣本，可以不用第1步操作，可直接加入ACK Lysis Buffer 進行第2步操作，并在4℃或室溫裂解。對于鼠的血液，裂解已經足夠；對于人的外周血，宜延長裂解時間，但通常不宜超過，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。

四、血液樣本的快速操作(無需洗滌)：
1、新鮮抗凝血中加入1×紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
（特別提醒：對于鼠的血液，裂解4～5min已經足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。）
2、加入PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液，輕柔混勻。
3、離心，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4、如果發現紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3一次。
5、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數、培養等后續實驗。

1、制備細胞懸液時應根據實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。
2、后續試驗如果是用于細胞培養，操作過程中應注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內操作。
3、離心步驟盡量在4℃離心機上操作。
4、常規步驟與快速步驟的區別在于：常規步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。
5、離心洗滌后，通常極微量的紅細胞不會影響后續的檢測。
6、如果經過1×紅細胞裂解液處理后的樣品后續用于總RNA的提取，在處理細胞時不必使用DEPC處理的溶液，即無需在該操作中特意去除RNase。
7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。