紅細(xì)胞裂解液，10X

        在生物科研領(lǐng)域，經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞。去除紅細(xì)胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer 、Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液、Gey's Lysis Buffer 。紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一種從人、鼠或其他哺乳動(dòng)物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無(wú)核紅細(xì)胞的溶液，其主要有效成分為NH4Cl 。
        愛必信提供的紅細(xì)胞裂解液（10X），配方經(jīng)過優(yōu)化不同于ACK Lysis Buffer ，在裂解無(wú)核紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。對(duì)于裂解、去除有細(xì)胞核紅細(xì)胞，例如鳥或禽類的紅細(xì)胞，效果不佳，裂解類似細(xì)胞時(shí)，不建議采用。該裂解液經(jīng)過濾除菌，為10X 濃縮液，使用本產(chǎn)品處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)，尤其適用于流式細(xì)胞檢測(cè)或需要高濃度裂解液的情況。

操作步驟(僅供參考)：
注意：絕大多數(shù)情況下，應(yīng)使用無(wú)菌去離子水稀釋紅細(xì)胞裂解液(10×)使用，流式細(xì)胞術(shù)除外。

一、組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作：
1、制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2、裂解: 加入細(xì)胞沉淀體積的紅細(xì)胞裂解液，輕柔吹打混勻，裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、離心，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。
5、洗滌：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。離心，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。
6、如有必要，重復(fù)上述步驟5一次，共洗滌1～2次。
7、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

二、組織細(xì)胞樣本的快速操作(無(wú)需洗滌)：
1、制備細(xì)胞懸液：新鮮組織經(jīng)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，制備細(xì)胞懸液，離心棄上清。
2、裂解：加入1×紅細(xì)胞裂解液，輕柔吹打混勻，裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、加入PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
4、離心，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。
5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2～4各一次。
6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

三、血液樣本的常規(guī)操作：
1、取新鮮抗凝血，離心，棄上清。
2、裂解: 加入1×紅細(xì)胞裂解液，輕柔吹打混勻，裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。(特別提醒：對(duì)于鼠的血液，裂解已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間，并且裂解過程中輕輕搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)
3、離心，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。
5、洗滌: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。離心，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。
6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注意：對(duì)于微量或少量的血液樣本，可以不用第1步操作，可直接加入ACK Lysis Buffer 進(jìn)行第2步操作，并在4℃或室溫裂解。對(duì)于鼠的血液，裂解已經(jīng)足夠；對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間，但通常不宜超過，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

四、血液樣本的快速操作(無(wú)需洗滌)：
1、新鮮抗凝血中加入1×紅細(xì)胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
（特別提醒：對(duì)于鼠的血液，裂解4～5min已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。）
2、加入PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
3、離心，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。
5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1、制備細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，不一定要制備成單細(xì)胞懸液。
2、后續(xù)試驗(yàn)如果是用于細(xì)胞培養(yǎng)，操作過程中應(yīng)注意無(wú)菌操作，盡量在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作。
3、離心步驟盡量在4℃離心機(jī)上操作。
4、常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。
5、離心洗滌后，通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的檢測(cè)。
6、如果經(jīng)過1×紅細(xì)胞裂解液處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細(xì)胞時(shí)不必使用DEPC處理的溶液，即無(wú)需在該操作中特意去除RNase。
7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。