Q：步驟上的可選步驟能否省略？A：該試劑盒是經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的，再進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的時(shí)候?qū)嶒?yàn)室都是要做這個(gè)可選步驟的，建議不要省略，按照說(shuō)明書(shū)操作。Q：proteinA和proteinGbeads怎么選？A：各5ul就可以了Q：超聲破碎冰上操作是必須的嗎？4℃條件能否微調(diào)？A：建議冰上操作，4℃是可以微調(diào)的。Q：beads出現(xiàn)吸不出來(lái)的情況，怎么處理？A：吸之前需注意槍頭要剪一下再吸，如若beads吸不上來(lái)，可加入等體積的20%乙醇混勻后再吸。Q：如果沒(méi)有超聲破碎儀的話，能不能用酶解...

1、血清封閉：組織切片上有剩余的位點(diǎn)可以與一抗非特異性結(jié)合，造成后續(xù)結(jié)果的假陽(yáng)性；因此需要使用封閉劑進(jìn)行封閉。常用試劑為血清和BSA等。封閉血清一般是和二抗同一來(lái)源的，但不能與一抗來(lái)源一致。2、一抗和二抗?jié)舛群头跤龝r(shí)間：一抗孵育條件在免疫組化反應(yīng)中zui重要，包括孵育時(shí)間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果*；孵育時(shí)間與溫度、抗體濃度有關(guān)，一般37度1-2h，4度過(guò)夜（從冰箱拿出后37度復(fù)溫45min）。具體條件還要摸索。二抗一般室溫或37度30m...

標(biāo)簽抗體，別名為抗原表位，又稱(chēng)抗原決定簇，是抗原分子中決定抗原特異性的特殊區(qū)域或基團(tuán)，是與抗體特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)或序列。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，科研人員可以通過(guò)DNA重組技術(shù)，構(gòu)建包含目的基因以及表位標(biāo)記的融合蛋白，進(jìn)而通過(guò)特異性標(biāo)簽抗體對(duì)其鑒定與純化，以達(dá)到研究的需求。常用的標(biāo)簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。1.Flag標(biāo)簽—抗Flag標(biāo)簽抗體Flag標(biāo)簽系統(tǒng)是利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標(biāo)蛋白。Flag標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該...

1、標(biāo)本固定：固定的目的是：①，防止標(biāo)本從玻片上脫落；②，除去防礙抗原—抗體結(jié)合的類(lèi)脂，使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果；③，固定的標(biāo)本易于保存。固定劑的選擇一般用4%多聚甲醛。2、脫水、石蠟包埋和制片：脫水用梯度乙醇（由低到高）充分脫水、對(duì)組織要*浸蠟、切片時(shí)刀片要干凈和鋒利。否則容易裂片和脫片等。3、脫蠟和水化：這是為了后面的抗體等試劑能夠充分與組織中抗原等結(jié)合反應(yīng)。脫蠟可以先60度20min，然后立即二甲苯1-3分別10min，但當(dāng)天制好的切片可以60度3-4h。...

Q:什么是霍亂毒素？A:霍亂毒素由（Choleratoxin,CT）兩個(gè)亞單位組成，即A亞單位（CTA）和B亞單位（CTB）。A亞單位是霍亂毒素的活性部分，B亞單位的主要功能是通過(guò)與哺乳動(dòng)物小腸上皮細(xì)胞上的單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂GM1結(jié)合而使得A亞單位進(jìn)入細(xì)胞。Q:霍亂毒素是如何反激活的？A:霍亂毒素由霍亂操縱子（ctx）編碼，從5'到3'方向，依次是反激活因子ToxR的識(shí)別序列、啟動(dòng)子、A基因（ctxA）、B基因（ctxB）和不依賴(lài)于r因子的轉(zhuǎn)錄終止系列。現(xiàn)在普遍認(rèn)為操縱子中只...

血清小知識(shí)血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，而且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出...

檢測(cè)某一個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)物或者要比較表達(dá)產(chǎn)物量的相對(duì)變化，方法是westernblot。而WesternBlot試驗(yàn)中比較這些的前提條件是等量的細(xì)胞上樣，這樣才有比較的基礎(chǔ)。而人為的操作會(huì)產(chǎn)生一定的誤差，這些誤差可以通過(guò)測(cè)定每個(gè)樣品中實(shí)際轉(zhuǎn)到膜上的內(nèi)參來(lái)校正。因此選擇一個(gè)合適的內(nèi)參抗體來(lái)校正上樣誤差是非常重要的。所以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)腤esternBlot實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中需要有良好的參照體系，后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析才具有說(shuō)服性。在WesternBloting實(shí)驗(yàn)中，可能內(nèi)參即是內(nèi)部參照(Intern...

激動(dòng)劑抑制劑可抑制腸神經(jīng)系統(tǒng)釋放ACh,減緩胃腸道動(dòng)力.在健康人，哌波色羅能對(duì)抗西沙必利對(duì)結(jié)腸的促動(dòng)力作用，延緩結(jié)腸傳輸，但不改變結(jié)腸的感覺(jué)和順應(yīng)性；拮抗外源性.5-HT所致的腸道蠕動(dòng)反射。在腹瀉型IBS患者中，哌波色羅可以延長(zhǎng)口-盲傳輸，使結(jié)腸蠕動(dòng)減弱，降低直腸敏感性，從而改善患者的癥狀。激動(dòng)劑抑制劑可升高觸發(fā)小腸蠕動(dòng)的壓力感受閾值和降低小腸壁的順應(yīng)性。Meuse等發(fā)現(xiàn)在脊髓背角淺層初級(jí)傳入神經(jīng)末梢有5-HT7受體的表達(dá)，參與大鼠傷害性感受器的激活。目前尚無(wú)5-HT7受體制...