預(yù)制膠常見問題指南
更新時間：2018-03-15 點擊次數(shù)：6875
注意事項 ★一定要使用我們盒內(nèi)配套的電泳緩沖液； ★上樣量和濃度不能過高。
1.我們的預(yù)制膠與哪些品牌電泳槽兼容？
| ● Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System)；
● Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)；
● Life Technology (Invitrogen)；
● Novex Mini-Cell； | ● Mini Gel Tank (A25977) (請與EZbiolab 特制擋板配合使用)；
● 北京六一 DYCZ-25E；
● 君意東方 JY-SCZ2+；
● 天能 VE180。 |
2.Running buffer粉末如何溶解？ 電泳前，將running buffer 粉末用ddH2O溶解至500ml即可。
3.變性膠和非變性膠的區(qū)別？
變性膠與非變性的凝膠成分是一樣的，均不含SDS。兩者的*區(qū)別在于變性膠的running buffer中含SDS, 而非變性膠的running buffer不含SDS。
4.不同緩沖體系，蛋白遷移率不同？
Q1：為什么蛋白表達(dá)出來了，SDS-PAGE檢測時大小不符？
A1：進(jìn)行SDS-PAGE檢測的時候蛋白的凈電荷會影響遷移率。帶電量高的蛋白會結(jié)合較少的SDS，因此阻礙了蛋白泳動。富含脯氨酸的蛋白會在SDS-PAGE膠中移動得特別慢。但是如果蛋白的等電點在5-9之間，并且組成的氨基酸組分沒有明顯的偏好，那么目的蛋白遷移率與預(yù)期相差較遠(yuǎn)就很有可能不是由于凝膠電泳造成的。這個時候利用C-端或者N-端的標(biāo)簽進(jìn)行Western Blot，看是否由于蛋白被蛋白酶降解而導(dǎo)致多條目的條帶或者比預(yù)期小很多的條帶出現(xiàn)。如果蛋白酶過高可以嘗試換個缺陷菌株。
5.剝膠困難怎么辦?
*步: 用小刀劃開側(cè)邊的膠即可打開玻璃板
第二步：順著紅色的線用小刀輕輕劃一下
6.預(yù)染marker沒有跑出來條帶？
原因很可能是客戶沒有用我們的Hepes running buffer 來跑膠，而是用了如 tris-glycine等其他running buffer。
我們做過對比實驗，結(jié)果如下圖所示：
7.1.5mm的預(yù)制膠，您推薦的染色時間是幾分鐘合適？
微波爐加熱至少90℃，置于搖床上染色30min。
8.條帶跑斜或跑成點狀的原因是什么？
條帶跑斜和蛋白的濃度有關(guān)，不同的蛋白遷移速度， 不會有什么影響， zui終跑膠結(jié)果的條帶還是平的。
跑成點狀的原因是：
1、蛋白樣品的總濃度過高，適當(dāng)降低濃度。 2、樣品沒有處理充分 3、 沒有吹打上樣孔， 樣品沒有沉到膠孔底部。
9.尿素膠與TBE膠分離范圍是哪些呢？
| 尿素核酸預(yù)制膠分離范圍： | TBE核酸預(yù)制膠分離范圍： |
5% 50–1000 nt
10% 35–300 nt
15% 10–50 nt | 5% 200 bp–2 kb
10% 50 bp–1.5 kb
15% 20 bp–1 kb |
尿素膠跑的是單鏈的核酸分子，所以單位是一個核苷酸 Nucleotide，簡稱nt。TBE膠跑的是雙鏈核酸分子，所以單位是堿基對base pair，簡稱bp。
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