三種細(xì)胞消化的方式你知道哪個(gè)

　　常規(guī)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(增殖，凋亡，遷移，分化之類的)，受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤(rùn)洗的方法消化(難消化細(xì)胞例外)即可。但少數(shù)實(shí)驗(yàn)，比如病毒包裝，對(duì)細(xì)胞代數(shù)，對(duì)細(xì)胞狀態(tài)要求*。這個(gè)時(shí)候，胰酶消化，就是潤(rùn)洗，都會(huì)對(duì)細(xì)胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細(xì)胞包裝能力就會(huì)逐漸下降(當(dāng)然也有其它因素影響包裝效率)。這個(gè)時(shí)候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關(guān)酶的活性，來使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白。

　　細(xì)胞消化三種方式

　　機(jī)械消化法

　　直接用液體吹打或用刮刀，施予外力讓細(xì)胞與培養(yǎng)底物分離；適用于貼壁性弱的細(xì)胞傳代，但相較于其它消化方法，這種外力無法量化控制，細(xì)胞分散效果差，且可能會(huì)造成大量細(xì)胞破損，使內(nèi)容物釋放到培養(yǎng)基，進(jìn)而影響細(xì)胞傳代狀態(tài)。

　　離子螯合法

　　細(xì)胞膜表面蛋白大多需要鈣、鎂離子來維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié)，當(dāng)然也包含各種黏附蛋白(例：整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等)，螯合劑會(huì)在不破壞細(xì)胞膜表面蛋白的狀況下，抽離這些離子，使黏附蛋白失活而減少細(xì)胞-細(xì)胞間及細(xì)胞-底物間的連接作用，讓細(xì)胞較容易在施予外力時(shí)，脫離培養(yǎng)底物并促進(jìn)細(xì)胞分散。

　　0.02% EDTA是細(xì)胞傳代常用的離子螯合劑，在37℃作用效果很佳(消化較敏感的細(xì)胞可在4℃作用)，適用于消化一般貼壁性細(xì)胞或細(xì)胞表面標(biāo)記實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。

　　但EDTA無法用血清終止其反應(yīng)，所以在消化細(xì)胞后必須用緩沖鹽溶液(如：PBS)清洗離心，以免影響后續(xù)細(xì)胞貼盤效果。

　　酶消化法

　　用蛋白水解酶消化連接細(xì)胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì)，適用于消化貼壁性稍強(qiáng)的細(xì)胞。