如何將自然界中的生物發(fā)光現(xiàn)象運(yùn)用到報(bào)告基因中？

對(duì)于自然界中的生物發(fā)光現(xiàn)象，大家應(yīng)該都是比較熟悉的，其廣泛存在于海洋生物、微生物和陸生生物中。生物發(fā)光現(xiàn)象其實(shí)是在生物體內(nèi)由于生命過程中由化學(xué)反應(yīng)介導(dǎo)的將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能所產(chǎn)生的，這其中起到主要作用的是一種叫熒光素酶的物質(zhì)。熒光素酶是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱，具有代表性的是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶，被廣泛應(yīng)用到生物學(xué)的報(bào)告基因中——一類可以編碼熒光蛋白或酶，從而將看不見的底物轉(zhuǎn)化為發(fā)光或彩色產(chǎn)物的一類基因報(bào)告系統(tǒng)，光信號(hào)可通過發(fā)光檢測(cè)儀或CCD相機(jī)進(jìn)行檢測(cè)，是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域基礎(chǔ)研究的一個(gè)重要工具，廣泛應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)。

螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶雖然同屬于熒光素酶，但是它們的來源及發(fā)光原理、發(fā)光顏色、檢測(cè)波長(zhǎng)等都不盡相同。

表1 兩種熒光素酶作用原理的區(qū)別

螢火蟲熒光素酶發(fā)光原理：

海腎熒光素酶發(fā)光原理：

利用熒光素酶與底物結(jié)合發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的特性，可以把感興趣的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件克隆在熒光素酶基因的上/下游，構(gòu)建成熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，經(jīng)適當(dāng)刺激或處理后裂解細(xì)胞，測(cè)定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷刺激前后或不同刺激對(duì)感興趣的調(diào)控元件的影響。

圖2 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)流程圖

由于螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的底物和發(fā)光顏色不同，并且易于定量，檢測(cè)靈敏度高，所以在雙報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)中得到廣泛應(yīng)用。在雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)中螢火蟲熒光素酶一般是作為主報(bào)告基因， 海腎熒光素酶通常作為內(nèi)參報(bào)告基因，來標(biāo)定檢測(cè)用報(bào)告基因的測(cè)量結(jié)果，從而達(dá)到有效地減少實(shí)驗(yàn)誤差的目的。

愛必信雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒為檢測(cè)基因的表達(dá)量提供有效的手段，在 DLR檢測(cè)中，螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）和海腎螢光素酶（Renilla luciferase）的活性可在單個(gè)樣品中依次檢測(cè)。先以螢光素（Luciferin）為底物來檢測(cè)螢火蟲螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì)，同時(shí)加入腔腸素（Coelenterazine）檢測(cè)海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

? 兼容性好：本試劑盒的光信號(hào)可以兼容化學(xué)發(fā)光儀、酶標(biāo)儀或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。
? 準(zhǔn)確性高：系統(tǒng)包含海腎熒光素，可校正孔間細(xì)胞數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率、以及細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)造成的誤差，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
? 抗干擾性強(qiáng)：無細(xì)胞內(nèi)源活性干擾。

除以上介紹的雙熒光素酶報(bào)告試劑盒外我們提供多種熒光素酶檢測(cè)試劑盒、轉(zhuǎn)染試劑盒，以滿足不同用戶的使用需求。具體信息如下：