雙螢光素酶報告基因專題

更新時間：2023-04-11 點擊次數：1251

報告基因是一類使表達產物易于被檢測的基因，其作用原理是將報告基因的編碼序列及其表達調控序列與目的基因融合形成嵌合基因，在調控序列的作用下進行表達，通過對報告基因表達產物的檢測來評價目的基因的表達狀況。

常見的報告基因包括螢光素酶（Luciferase）、氯霉素乙酰轉移酶（CAT）、β-半乳糖苷酶（β-gal）、分泌性人胎盤堿性磷酸酶（SEAP）和綠色熒光蛋白（GFP）等。

螢光素酶（Luciferase）是一類在生物體內能夠催化熒光素或脂肪醛氧化發光的酶，從自然界能夠發光的生物體內分離獲得。由于特異性強、靈敏度高、內源性低、檢測不受細胞內其他物質的影響等優點，螢光素酶被作為報告基因（標記蛋白）而被廣泛應用。

雙螢光素酶報告基因檢測系統在單螢光素酶報告基因的基礎上引入了“內參對照"報告基因，這樣可以減小細胞數目、細胞生長狀態和轉染效率等外在因素對于實驗的影響，使得實驗結果更為可信。

本期小愛給大伙帶來一款愛必信爆款雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒：雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60341）。

表1 雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60341）

組分	名稱	100T	1000T
A	5× Passive Luciferase Lysis Buffer	10ml	100ml
B	Firefly Luciferase Assay Buffer	10ml	100ml
C	D-Luciferin	2mg	20mg
D	Renilla Luciferase Assay Buffer	10ml	100ml
E	50×Coelenterazine	200ul	2×1ml

一、產品特點

二、產品介紹

本試劑盒先以螢光素（Luciferin）為底物來檢測螢火蟲螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質，同時加入腔腸素（Coelenterazine）檢測海腎螢光素酶的活性，實現雙螢光素酶報告基因檢測。適用于瞬時轉染實驗、需要共報告基因建立內參或實現多重信號、需要報告基因減弱的情況如研究負調控對刺激產生的細胞反應、實現較高檢測精度等情況。

圖1 雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒實驗流程

三、應用

雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒是一款應用廣泛的科研工具，舉例跟大家詳細介紹下常見的螢光素酶報告基因的應用。

應用1：順式作用原件研究

**表示差異極顯著（P<0.01），* 表示差異顯著（P<0.05）

圖2 雞骨形態生成蛋白15（bone morphogenetic protein 15, BMP15）基因不同啟動子截短體報告載體的雙螢光報告結果

雞骨形態生成蛋白15（bone morphogenetic protein 15, BMP15）基因不同啟動子截短體報告載體的雙螢光報告結果顯示，BMP15基因啟動子-153-1 bp 為核心區域。

應用2：細胞信號通路研究

圖3 檢測不同濃度的HLY78系列衍生物對Wnt信號通路報告基因TOPflash的螢光素酶活性影響

通過檢測不同濃度的HLY78系列衍生物對Wnt信號通路報告基因TOPflash的螢光素酶活性影響，篩選出HLY78和HLY119對Wnt信號通路有抑制作用。

應用3：反式作用因子研究

圖4 在-562- -200位點是Runx1 發揮對Mrgprd 基因的轉錄激活的關鍵位點

圖5 Runx1 通過+70 ～ +143位點序列促進Mrgprd基因轉錄

Runx1（轉錄因子）對Mrgprd基因的轉錄調控機制可能有多種，并非只是通過結合在Mrgprd基因上游的結合位點來直接調控其轉錄。

應用4：miRNA靶點研究

圖6 miRNA靶點研究案例

miR-1269b過表達可明顯降低293T細胞中METTL3-WT的螢光素酶活性，但對METTL3-MUT的活性沒有顯著影響，表明miR-1269b可靶向METTL3 3’UTR，負調控GC細胞中METTL3的表達。

注：應用數據均來自文獻

四、實驗數據

圖7 Abisn雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒與市面上同類產品對比結果

使用愛必信雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60341）與市面上的同類產品進行對比實驗，發現螢火蟲螢光素酶與海腎螢光素酶比值與國外同類產品最為接近。

最后，跟大家透漏個好消息：雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒（abs60341）本月3折優惠！！！

本期搭檔產品小愛推薦：
? 高效轉染 ? 低毒性 ? 操作簡單

貨號	產品名稱	規格
abs60322	Lipofect5000 質粒轉染試劑	0.5ml/1.0ml
abs60327	SP懸浮細胞質粒DNA轉染試劑	0.5ml/1.0ml/1.5ml
abs60255	質粒DNA轉染試劑盒（貼壁細胞）	0.5ml/1.0ml/1.5ml
abs60256	PM原代細胞質粒DNA轉染試劑盒	0.5ml/1.0ml/1.5ml
abs60369	RF 293細胞DNA轉染試劑盒	0.5ml/1.5ml
abs60257	溶液A（轉染增強劑，僅用于質粒DNA轉染）	0.25ml/0.5ml/1ml

參考文獻

[1] 趙海衛, 韓佩君, 呂欣, 等. 螢光素酶報告基因在病毒學研究中的應用[J]. 生物技術通訊, 2015, 26(1): 131-134.

[2] Nature chemical biology vol. 9,9 (2013): 579-85. doi:10.1038/nchembio.1309.

[3] 高廣亮, 李輝, 王啟貴. 雞肝臟基礎型脂肪酸結合蛋白基因啟動子活性分析[C]// 中國畜牧獸醫學會家禽學分會代表會議暨全國家禽學術討論會. 2013.

[4] Kang, Jian , et al. "MicroRNA-1269b inhibits gastric cancer development through regulating methyltransferase-like 3 (METTL3)." Bioengineered 12.1(2021):1150-1160.

[5] 劉子敬, 曹誠. 轉錄因子Runx1對Mrgprd基因轉錄調控的分子機制研究[J]. 華南國防醫學雜志, 2020, 34(9):5.

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