呼吸爆發(fā)檢測(cè)試劑盒的原理及操作方法

　　呼吸爆發(fā)（respiratory burst）是指在激活的髓系細(xì)胞，如中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等，受到刺激后大量釋放以氧化細(xì)胞代謝產(chǎn)生過(guò)程中的超氧陰離子等活性物質(zhì)，從而維護(hù)機(jī)體抵御外界侵略因素的能力。而呼吸爆發(fā)檢測(cè)則是評(píng)估和監(jiān)測(cè)機(jī)體免疫、炎癥和感染狀態(tài)的一種方法。現(xiàn)代科技的發(fā)展使得呼吸爆發(fā)檢測(cè)可以通過(guò)檢測(cè)試劑盒快速、準(zhǔn)確地完成。

　　呼吸爆發(fā)檢測(cè)試劑盒廣泛應(yīng)用于臨床、研究和實(shí)驗(yàn)室等領(lǐng)域，用于以下方面的檢測(cè)：

　　1.免疫缺陷病變的早期發(fā)現(xiàn)

　　2.炎癥反應(yīng)的評(píng)估

　　3.感染狀態(tài)的檢測(cè)

　　4.尋找急性肥厚性髓樣細(xì)胞白血病等疾病的鑒別診斷

　　5.研究呼吸爆發(fā)與細(xì)胞免疫關(guān)系的科學(xué)問(wèn)題

　　目前常用的呼吸爆發(fā)檢測(cè)試劑盒是基于激活后的髓系細(xì)胞釋放產(chǎn)物的顏色變化或熒光變化來(lái)測(cè)量呼吸爆發(fā)的活躍程度。其原理可以分為兩種：比色法和熒光法。

　　比色法原理：在具有呼吸爆發(fā)能力的髓系細(xì)胞受到適當(dāng)激動(dòng)劑的刺激后，需要內(nèi)源性的NADPH氧化酶（NOX）介導(dǎo)合成超氧陰離子（O2-）。比色法檢測(cè)過(guò)程中，NOX會(huì)將非熒光底物OXID（2,3,5-三苯基四氮梯）還原成熒光有機(jī)化合物REDF（2,7-二叔丁基-4,5-二苯基-1,2,4-三唑-3-硫醇）。產(chǎn)生的熒光可被熒光儀測(cè)量，其強(qiáng)度與NOX活性相關(guān)。

　　熒光法原理：熒光法同樣是基于NOX產(chǎn)生的超氧陰離子，但是其鑒定物質(zhì)不同，常用的鑒定熒光物質(zhì)是二苯基巨環(huán)（dihydropyridine，DHR）。熒光素自身不惰性，在被刺激后會(huì)被轉(zhuǎn)化為惰性化合物。DHR在被NOX還原后，會(huì)變?yōu)楦邿晒獾难趸铮╫xiDHR），其強(qiáng)度也會(huì)被熒光儀檢測(cè)到。

　　呼吸爆發(fā)檢測(cè)試劑盒的操作方法

　　雖然有些不同種類的呼吸爆發(fā)檢測(cè)試劑盒在操作過(guò)程中有不同的步驟和條件，但大致操作流程可歸納為以下幾個(gè)步驟：

　　1.收集患者或?qū)嶒?yàn)室動(dòng)物的血樣。血樣需要防止血凝塊形成，如使用抗凝管或具有抗凝劑的收集器。

　　2.加入合適劑量的呼吸爆發(fā)刺激劑。刺激劑被認(rèn)為對(duì)不同細(xì)胞類型的激發(fā)程度不同，需要根據(jù)檢測(cè)對(duì)象選擇刺激劑。

　　3.加入比色劑或熒光劑，隨后等待適當(dāng)時(shí)間，直至出現(xiàn)熒光變化或顏色變化。

　　4.使用相應(yīng)的電子設(shè)備（比如熒光測(cè)量?jī)x）讀取數(shù)據(jù)，據(jù)此評(píng)估呼吸爆發(fā)的程度和活躍性。