全國服務(wù)咨詢熱線:

                15000105423

                article技術(shù)文章
                首頁 > 技術(shù)文章 > 腸道固有層免疫細(xì)胞分離制備指南

                腸道固有層免疫細(xì)胞分離制備指南

                更新時間:2025-02-13      點(diǎn)擊次數(shù):528

                1、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

                 

                試劑準(zhǔn)備

                 

                40% Percoll溶液配制:

                Percoll細(xì)胞分離液與PBS緩沖液(10×)按體積比9:1混合,配制等滲100% Percoll母液。用100% Percoll母液和RPMI 1640/1×PBS按體積比4:6混合,配制40%等滲Percoll溶液。

                 

                80% Percoll溶液:

                Percoll細(xì)胞分離液與PBS緩沖液(10×)按體積比9:1混合,配制等滲100% Percoll母液。用100% Percoll母液和RPMI 1640/1×PBS按體積比8:2混合,配制80%等滲Percoll溶液。

                 

                2、腸道固有層免疫細(xì)胞分離步驟操作步驟

                 

                1)頸椎脫臼法處死小鼠并固定在手術(shù)臺上,75%酒精消毒小鼠腹部,于正中縱行剪開暴露腹腔;

                2)如下圖所示,在小鼠胃與十二指腸連接處剪斷,一邊分離小腸周圍脂肪組織和腸系膜,一邊拉出小腸,之后在小腸和盲腸連接處剪斷,從而分離出小腸。

                 

                小鼠腸道組織解剖圖

                 

                3)10cm培養(yǎng)皿中加入5mL 4°C預(yù)冷的PBS,將步驟2中的小腸放入培養(yǎng)皿潤洗,使用鑷子和剪刀依次去除脂肪組織和派伊爾結(jié)。

                 

                小鼠派伊爾結(jié)去除操作圖

                 

                A. 去除表面脂肪和腸系膜等組織的小腸,紅色箭頭指示派氏結(jié)(平均每只小鼠有6-9個派氏結(jié));

                B. 剪去派氏結(jié)的操作示意圖;

                C. 去除派氏結(jié)后的小腸,紅框是所有剪下來的所有派氏結(jié)。

                小鼠派伊爾結(jié)(Peyer's patches, PPs)是小鼠腸道黏膜免疫系統(tǒng)的重要組成部分,主要分布在小鼠小腸的下部,即遠(yuǎn)端空腸和回腸,與小鼠固有層免疫細(xì)胞的組成和功能有顯著差異,在分離小鼠腸道免疫細(xì)胞時,去除派伊爾結(jié)是為了確保獲得更純凈、更具代表性的目標(biāo)細(xì)胞群體,從而提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

                 

                4)將小腸切成4段,用剪刀縱向剪開小腸(不必沿著腸系膜方向),暴露出腸內(nèi)容物,輕輕地將腸內(nèi)容物從粘膜表面刮除;

                5)將小腸轉(zhuǎn)移到含有10mL HBSS + 2%FBS的50mL離心管中,劇烈渦旋10-20s;

                6)用鑷子取出小腸重復(fù)清洗2次;

                7)將清洗過的腸組織,剪碎成0.5cm的小片段,將組織塊(100-200mg)轉(zhuǎn)移到2mL圓底管中,加入1mL小鼠腸道組織解離液(abs50093),37°C水平搖床輕輕搖晃孵育60min(根據(jù)組織糜爛狀態(tài)適當(dāng)延長孵育時間);

                8)從水平搖床中取出圓底管,劇烈渦旋10-20s,通過70μm細(xì)胞篩網(wǎng)(abs7232)過濾,用10mL PBS沖洗細(xì)胞篩網(wǎng);

                9)收集含有細(xì)胞的濾液到50mL管中,20°C下400g離心5min,棄上清液,用 4 mL 40% percoll(abs9102)重懸細(xì)胞沉淀并轉(zhuǎn)移到 15 mL 離心管;

                10)吸取 2.5 mL 80% percoll 深入到 15 mL 離心管底部,試管稍微傾斜,將 4 mL 40% percoll 與細(xì)胞的混合液沿著管壁緩慢加入離心管,覆蓋在 80% percoll 溶液的頂部形成密度梯度;

                ▲ 注意:不要破壞 80% percoll 和 40% percoll 與細(xì)胞的懸浮液的分界面,40% 和 80% percoll 現(xiàn)配現(xiàn)用。

                11)800 g 20 °C 離心 20 min,升速(ACC)1,降速(DEC)1;

                 

                Percoll 分離組織免疫細(xì)胞示意圖

                 

                注:分離圖片參考自文獻(xiàn) DOI: 10.21769/BioProtoc.1010327

                 

                12)離心結(jié)束后,吸取中間白膜層免疫細(xì)胞至新的 15 mL 離心管中,加入 3 倍體積 4°C 預(yù)冷 PBS,上下顛倒混勻,4 °C 下 400 g 離心 5 min,棄上清;

                13)按照步驟 12 重復(fù)清洗一次,棄上清得到腸道固有層淋巴細(xì)胞;

                14)細(xì)胞染色緩沖液(abs9475)重懸細(xì)胞沉淀,并調(diào)整細(xì)胞濃度至 5-10×106 cells/mL,將 100 μL/管的細(xì)胞懸液分配到 12×75 mm 的流式管(abs7303)中用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。

                 

                3、流式實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖

                 

                 

                4、相關(guān)產(chǎn)品推薦


                貨號

                品名

                規(guī)格

                用途

                abs9474

                組織保存液

                100mL

                保存組織

                abs50093

                小鼠腸道組織解離試劑盒

                25T

                消化組織酶

                abs9102

                細(xì)胞分離液

                100mL

                富集細(xì)胞

                abs7232

                70um 細(xì)胞篩網(wǎng)

                100 個

                篩網(wǎng)

                abs7303

                5mL 流式管(無菌無酶,帶帽)

                500 個

                流式管

                abs9475

                細(xì)胞染色緩沖液

                500mL

                染色緩沖液




                 

                更多流式好物推薦


                貨號

                產(chǎn)品名稱

                規(guī)格

                abs9907

                流式絕對計(jì)數(shù)管

                50T

                abs9477

                小鼠 Fc 受體阻斷劑

                200T/500T

                abs9476

                人 Fc 受體阻斷劑

                50T/200T

                abs9488

                鞘液

                20L

                abs9107

                佛波酯

                1mg/5mg/25mg

                abs9108

                離子霉素鈣鹽

                1mg/5mg

                abs970

                D-PBS緩沖液(1×,無鈣鎂)

                500mL

                abs810012

                Brefeldin A

                10mg/25mg/50mg

                abs812975

                Monensin sodium salt

                25mg/100mg

                abs9110

                固定劑

                50mL

                abs9111

                破膜劑

                150mL

                abs7303

                5mL流式管(無菌無酶,帶蓋)

                1箱

                abs1840002

                APC Mouse anti-Human CD3 Antibody(3JI3-9)

                25T/100T

                abs182427

                PE Mouse anti-Human CD4 Antibody(5D4)

                25T/100T

                abs182430

                FITC Mouse anti-Human CD8 Antibody(3C4)

                25T/100T

                abs180046

                PE-Cy7 Mouse anti-Human CD25 Antibody(BC96)

                25T/100T

                abs1840696

                FITC Mouse anti-Human CD80 Antibody(2D10.4)

                25T/100T

                abs182338

                APC Rat anti-Mouse CD25 Antibody(4APC61.5)

                25T/100T

                More......




                 

                Absin產(chǎn)品線:

                爆款產(chǎn)品:試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測);細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒;分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒);化合物大包裝;輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

                特色產(chǎn)品:雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

                愛必信(上海)生物科技有限公司
                地址:上海市浦東新區(qū)新浩路58號申江科創(chuàng)園18棟
                郵箱:chenjw@absin.cn
                傳真:
                關(guān)注我們
                歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息:
                歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號
                了解更多信息
                主站蜘蛛池模板: 国产午夜福利精品一区二区三区| 正能量www正能量免费网站| 嫩草影院在线观看精品视频| 亚洲黄色a级片| 手机看片福利永久国产日韩| 日本猛少妇色xxxxx猛交| 午夜阳光电影在线观看| 性欧美激情videos| 拍摄直播play文h| 亚洲综合无码一区二区| 欧美精品www| 天天干天天综合| 亚洲国产精品无码久久久| 麻豆国产高清精品国在线| 成人在线观看不卡| 亚洲熟妇AV乱码在线观看| 97碰公开在线观看免费视频| 成人乱码一区二区三区AV| 亚洲熟妇少妇任你躁在线观看| 色吊丝中文字幕| 在线免费中文字幕| 久久精品视频91| 欧美精品色婷婷五月综合| 国产午夜视频高清| 4408私人影院| 无码人妻一区二区三区免费视频| 人妻大战黑人白浆狂泄| 国产一区二区三区夜色| 工囗番漫画全彩无遮挡| 亚洲国产午夜电影在线入口| 色综合久久综合欧美综合图片| 在线观看日本中文字幕| 中文字幕侵犯一色桃子视频| 精品久久久久久中文字幕无码软件| 国产精品视频视频久久| 久久久不卡国产精品一区二区| 波多野结衣免费一区视频| 国产午夜精品一区二区三区漫画| 69天堂人成无码麻豆免费视频| 妞干网免费在线视频| 久久99久久99精品免视看动漫|