CTB標(biāo)記脂筏(LR)解決方案

脂筏（lipid raft microdomains, LR）是細(xì)胞膜上富含膽固醇和鞘脂的微小結(jié)構(gòu)域（圖1），具有物理化學(xué)特性，可作為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞黏附和蛋白質(zhì)運(yùn)輸?shù)汝P(guān)鍵生物學(xué)過程的調(diào)控樞紐。近年研究發(fā)現(xiàn)，LR的功能異常與多種疾病密切相關(guān)，包括腫瘤、神經(jīng)退行性疾病和心血管疾病等。由于其重要的病理生理作用，以LR為靶點(diǎn)開發(fā)新型治療策略已成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。

圖1 LR 的結(jié)構(gòu)與組成[1]

霍亂毒素B亞單位（Cholera Toxin B subunit, CTB/ CTxb）是一種廣泛應(yīng)用于脂筏（Lipid Rafts）標(biāo)記、內(nèi)吞作用研究和神經(jīng)科學(xué)的經(jīng)典工具。愛必信提供的CTB 可用作神經(jīng)元示蹤劑、細(xì)胞膜標(biāo)記、免疫佐劑等。產(chǎn)品經(jīng)過嚴(yán)格優(yōu)化，適用于高分辨率成像、流式分析和功能研究。

產(chǎn)品核心優(yōu)勢： ?13 年深厚研發(fā)積淀與實(shí)踐驗(yàn)證，技術(shù)成熟可靠； ?已被 68 篇高分文獻(xiàn)引用，為科研提供有力支撐； ?現(xiàn)貨供應(yīng)常規(guī)CTB和 FITC標(biāo)記的CTB； ?可定制更多熒光素標(biāo)記的CTB，如AF488/AF555/AF594； ?作用效果比肩進(jìn)口品牌，高品質(zhì)，高性價(jià)比。

2024年10月，上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)與化學(xué)生物學(xué)系俞志華研究團(tuán)隊(duì)在Translational Neurodegeneration（IF=10.8）上發(fā)表了題為“TRPV1 alleviates APOE4-dependent microglial antigen presentation and T cell infiltration in Alzheimer’s disease"的研究論文，文中CTxb-FITC（abs80003，霍亂毒素B亞單位偶聯(lián)FITC） 被用作脂筏標(biāo)記物，用于研究 APOE4 對微膠質(zhì)細(xì)胞脂筏結(jié)構(gòu)及抗原呈遞功能的影響，以及 TRPV1 通道的調(diào)控作用。

CTxb-FITC在該研究中用于標(biāo)記細(xì)胞膜上的脂筏，具體功能包括：

脂筏定位：CTB結(jié)合細(xì)胞膜上的GM1神經(jīng)節(jié)苷脂（脂筏的標(biāo)志性成分），通過FITC熒光標(biāo)記可視化脂筏的分布。

共定位分析：與MHC II分子（PE標(biāo)記）的共定位實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證APOE4如何通過膽固醇積累促進(jìn)MHC II在脂筏中的聚集，從而增強(qiáng)抗原呈遞功能。

實(shí)驗(yàn)方法[2]

細(xì)胞處理：室溫下，用4%多聚甲醛處理BV2小膠質(zhì)細(xì)胞10分鐘。

阻斷與染色：

阻斷液：用含5% BSA的PBS孵育，封閉非特異性位點(diǎn)。

染色：加入CTxb-FITC（8 μg/mL）和MHC II-PE（2 μg/mL），4°C孵育30分鐘。然后再用DAPI染色細(xì)胞核。

成像：TCS SP8共聚焦顯微鏡拍攝，ImageJ分析共定位信號。

細(xì)胞模型：BV2小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系，用ApoE3/ApoE4（4 μg/mL）和tau蛋白纖維（PHF）處理。

TRPV1激活：辣椒素（capsaicin, 1 μM, abs817025）預(yù)處理30分鐘。

脂筏與MHC II共定位：通過CTxb-FITC（abs80003）和MHC II-PE雙標(biāo)，驗(yàn)證TRPV1激活后MHC II從脂筏的移位。

流式細(xì)胞術(shù)：分析MHC II表達(dá)。

鈣成像：Fluo-4 AM檢測胞內(nèi)鈣信號（abs47014952）。

免疫熒光：共聚焦顯微鏡觀察脂筏、MHC II、溶酶體（LysoTracker, abs47038871）等。

1. 樣品處理與固定

避免過度固定：使用4%多聚甲醛（abs9179）固定10-15分鐘（室溫），避免醛類過度交聯(lián)破壞脂筏結(jié)構(gòu)。甲醇/丙酮等有機(jī)溶劑固定會溶解脂筏，不可使用。

洗滌：固定后用 PBS（無去垢劑） 輕柔洗滌3次，防止脂筏破壞。

阻斷液推薦含5% BSA的PBS 或 1-5% 血清（同源血清最佳），室溫阻斷30分鐘。避免使用含去垢劑（如Triton X-100）的阻斷液，以免溶解脂筏。

濃度優(yōu)化：CTB-FITC推薦工作濃度1-10 μg/mL（需預(yù)實(shí)驗(yàn)確定，過高濃度增加背景），用PH7.4的PBS稀釋。

孵育時(shí)間與溫度：4°C孵育30分鐘（減少內(nèi)吞作用，保持膜表面GM1標(biāo)記）。若需標(biāo)記內(nèi)化GM1，可改為 37°C孵育15-30分鐘。

避光操作：CTB-FITC對光敏感，全程避光。

多色標(biāo)記順序：先染CTB-FITC（脂筏），固定后再染其他抗體（如MHC II）。若需胞內(nèi)抗原（如溶酶體蛋白），需在CTB染色后透化（0.1% Saponin，abs815978）。

對照設(shè)置：

陰性對照：用甲基-β-環(huán)糊精（Me-β-CD，2-5 mM，abs47047467）預(yù)處理細(xì)胞耗竭膽固醇，CTB信號應(yīng)消失。

陽性對照：膽固醇富集處理（如LDL加載）。

[1]基于脂筏治療相關(guān)疾病的研究進(jìn)展. 海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)

[2]TRPV1 alleviates APOE4-dependent microglial antigen presentation and T cell infiltration in Alzheimer's disease. Transl Neurodegener.