Human IL-8/CXCL8 ELISA Kit

檢測原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗人IL-8抗體預(yù)包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本和生wu素化的檢測抗體，經(jīng)過孵育，樣本中存在的IL-8與固相抗體和檢測抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物，避光顯色。加入終止液終止反應(yīng)，在450 nm波長(參考校正波長540nm或570nm)測定吸光度值。

檢測類型：雙抗夾心法

形式：預(yù)包被96孔板

檢測樣本類型：細胞上清液，血清，血漿

上樣量：100ul

試劑盒組分：

預(yù)包被96孔板、標準品、IL-8檢測抗體、稀釋用緩沖液、顯色液（A、B）、洗滌液、終止液、SA-HRP、封板膜和說明書一份。

靈敏度：7.8pg/mL

檢測范圍：31.2 - 2,000 pg/mL

回收率范圍：96-118%

保存方法：2-8℃

標準曲線圖

背景：

白細胞介素-8（IL-8，也稱GCP-1、NAP-1和CXCL8）是屬于α型或CXC家族的8-9kDa的趨化因子，可與肝素結(jié)合。目前為止，共發(fā)現(xiàn)了15種人的CXC家族蛋白，大小在8-12kDa之間。絕大多數(shù)位于人類4號染色體，都具有典型的三β折疊層/一個α螺旋結(jié)構(gòu)，多數(shù)在N端顯示Glu-Leu-Arg三肽基序。人IL-8先合成為一個99氨基酸前體，其中包含一個20氨基酸的信號序列，和一個79個氨基酸的成熟區(qū)域。它可作為單體、同源二聚體、及與CXCL4/PF4形成的異源二聚體在體內(nèi)循環(huán)。IL-8單體被認為是具有生物活性的，而異源二聚體可能會增強PF4的活性。在氨基酸水平，成熟的人IL-8與豬和犬分別有65%和70%的同源性。在嚙齒動物中，IL-8的相應(yīng)基因尚未發(fā)現(xiàn)。通過選擇性剪接和差別蛋白水解產(chǎn)生了多種IL-8亞型。選擇性剪接發(fā)生在C-端，那里有一個11個氨基酸替代（位置在aa#92-99）。蛋白酶水解作用可能是一個細胞的特定事件，它在IL-8的N-端產(chǎn)生截斷。例如，成纖維細胞和血管內(nèi)皮細胞將第21和第22氨基酸切斷，形成IL-8，而單體細胞和淋巴細胞在第21-25氨基酸切割，產(chǎn)生IL-8。這些短式IL-8一般來說具有更高的生物活性，尤其是針對CXCR 1IL-8受體的活性增高。大約15%的IL-8在前體Arg27位發(fā)生了瓜氨酸化，這可提高IL-8的半衰期和促使白血球增多。很多類型的細胞都分泌IL-8，其中包括單核細胞和中性粒細胞、成纖維細胞和角質(zhì)形成細胞、肥大細胞、內(nèi)臟平滑肌細胞、樹突狀細胞、II型大肺泡細胞和內(nèi)皮細胞。

IL-8受體有兩個，都屬于G蛋白耦聯(lián)受體蛋白：CXCR1/IL-8RA和CXCR2/IL-8RB，二者之間的氨基酸序列享有77%同源性。CXCR1分子量為45-50kDa，幾乎*由IL-8獨享；CXCR2分子量為35-40kDa，由所有的CXC趨化因子所共有。CXCR1和CXCR2分別形成組成型同源二聚體，這似乎是它們的功能性構(gòu)型。當同一個細胞表達時，異源二聚體也會形成；但當它與IL-8結(jié)合后便會被解體。CXCR2對低濃度IL-8有響應(yīng)，且主要與趨化和MMP-9釋放有關(guān)。與此相反，CXCR1對高濃度IL-8有響應(yīng)，并與呼吸爆發(fā)及磷脂酶D2的激活有關(guān)。因此，在中性粒細胞CXCR2被認為可引導(dǎo)中性粒細胞遷移到炎癥部位，然后引發(fā)CXCR1介導(dǎo)的抗菌活性。

IL-8著名的功能是它在免疫細胞中的促炎作用。從本質(zhì)上講，IL-8是由暴露于炎性刺激因子的多種細胞類型分泌。對于單核細胞/巨噬細胞來說，微生物的暴露引起IL-8的釋放；隨后，CXCR2介導(dǎo)的趨化作用將中性粒細胞遷移到抗原攻擊的部位，并伴隨下一步抗菌活性的激活及啟動。IL-8可增強骨髓M-CSF的作用，從而引起粒細胞的成熟和釋放。IL-8的這兩個功能相輔相成。有報道說，IL-8對腫瘤相關(guān)的內(nèi)皮細胞具有血管生成功能。此時，腫瘤源性的IL-8可以采取一種旁分泌方式激活血管內(nèi)皮細胞的CXCR1和CXCR2。CXCR1和CXCR2都與PI3-K/Akt和RasGTP信號通路相關(guān)，參與細胞的存活和增殖。此外，IL-8正調(diào)節(jié)VEGFR2和EGFR屬于介導(dǎo)細胞生長和遷移的受體絡(luò)氨酸激酶。