快速內(nèi)切酶DpnI

簡(jiǎn)要描述：快速內(nèi)切酶DpnI最適反應(yīng)溫度下，將 1 μl DpnI 與 1 μg 超螺旋質(zhì)粒DNA 共同溫育 4 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，質(zhì)粒 DNA 仍然處于超螺旋狀態(tài)。

產(chǎn)品型號(hào)：abs60210
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時(shí)間：2025-03-26
訪問(wèn) 量：2735

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分子生物學(xué)

核酸提取/純化 qPCR系列 mRNA合成轉(zhuǎn)染產(chǎn)品分子克隆其它分子生物學(xué)試劑

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詳細(xì)介紹

品牌	absin	供貨周期	現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域	化工,生物產(chǎn)業(yè),能源

產(chǎn)品描述

描述

愛(ài)必信的快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過(guò)基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。愛(ài)必信的快速內(nèi)切酶具有如下特點(diǎn)：5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡(jiǎn)化酶切反應(yīng)體系；良好的酶活冗余度，輕松應(yīng)對(duì)底物過(guò)量或困難模板酶切。此外，愛(ài)必信生物去磷酸化、連接試劑在配套的Buffer中具有100%活性，支持一管化反應(yīng)，提升“酶切-修飾-連接"的體驗(yàn)。
識(shí)別位點(diǎn)：
5'...G Am6 ↓T C...3'
3'...C T↑ Am6G...5'
同裂酶：MalI
注：同裂酶對(duì)于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。

快速內(nèi)切酶DpnI產(chǎn)品組分：

名稱(chēng)	規(guī)格
DpnI	50 μl
10× Cut Buffer	1 ml
10× Cut Color Buffer	1 ml

使用方法

1. 快速內(nèi)切酶DpnIDNA 快速酶切流程：
① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

	質(zhì)粒 DNA	基因組 DNA
ddH2O	15 μl	30 μl
10× Cut Buffer 或 10× Cut Color Buffer	2 μl	5 μl
底物 DNA	2 μl (up to 1 μg)	10 μl (5 μg)
DpnI	1 μl	5 μl
Total	20 μl	50 μl

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；
③ 37℃溫育 15 min（質(zhì)粒），或 30~60 min（基因組 DNA）；
④ 80℃溫育 20 min 即可使酶失活，停止反應(yīng)（可選）。
2. 雙酶切或多酶切：
① 每種快速內(nèi)切酶的用量為 1 μl，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系；
② 所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過(guò)總反應(yīng)體系的 1/10；
③ 如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開(kāi)始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應(yīng)溫度下進(jìn)行酶切反應(yīng)。
3. 適用于質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系：

DNA	1 μg	2 μg	3μg	4 μg	5 μg
DpnI	1 μl	2μl	3 μl	4 μl	5 μl
10× Cut Buffer 或 10× Cut Color Buffer	2 μl	2 μl	3 μl	4 μl	5 μl
Total	20 μl	20 μl	30 μl	40 μl	50 μl

注：如果總反應(yīng)體系大于 20 μl，應(yīng)適當(dāng)增加溫育時(shí)間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。
不同 DNA 中的酶切位點(diǎn)數(shù)量：

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
116	0	22	15	15	8	7	87

甲基化修飾影響：

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
不能切割Dam-DNA	無(wú)影響	無(wú)影響	無(wú)影響	序列可能重疊剪切可能受影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性：

	Cut Buffer	Thermo Scientific FastDigest Buffer	NEB CutSmart® Buffer	Takara QuickCut™ Buffer
活性	100%	100%	100%	100%

儲(chǔ)存/保存方法

-20℃，有效期2年。

技術(shù)指標(biāo)

建議反應(yīng)條件：
1× Cut 緩沖液；
37℃溫育；
參照“DNA 快速酶切流程"配制反應(yīng)體系。
失活條件：
80℃溫育 20 min。
質(zhì)量控制：
功能活性檢測(cè)：
最適反應(yīng)溫度下，在 20 μl 反應(yīng)體系中，1 μl DpnI能夠在 15 min 內(nèi)*消化 1 μg pUC19 DNA。
超長(zhǎng)時(shí)間溫育檢測(cè)：
最適反應(yīng)溫度下，將 1 μl DpnI 與 1 μg pUC19 DNA共同溫育 3 h，未檢測(cè)到其他核酸酶污染或星號(hào)活性引起的底物非特異性降解，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號(hào)活性。
酶切 - 連接 - 再酶切檢測(cè)：
最適反應(yīng)溫度下，使用 1 μl DpnI 消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在 22℃下使用適量 Fast T4 DNA Ligase 可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開(kāi)連接產(chǎn)物。
非特異性內(nèi)切酶活性檢測(cè)：
最適反應(yīng)溫度下，將 1 μl DpnI 與 1 μg 超螺旋質(zhì)粒DNA 共同溫育 4 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，質(zhì)粒 DNA 仍然處于超螺旋狀態(tài)。

溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實(shí)驗(yàn)使用，不支持臨床等研究

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