免疫印跡及免疫沉淀用裂解液

產品描述：

Western及IP細胞裂解液，是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液。本細胞裂解液裂解的細胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀和免疫共沉淀。使用本裂解液時，用戶可以根據具體用途自行添加特定抑制劑或者不添加抑制劑。Western及IP細胞裂解液的主要成分為Tris-HCl，NaCl，去垢劑。可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。

使用本裂解液獲得的蛋白樣品，如果用于酶活性檢測或一些生物小分子的檢測，需要測試標準品用本裂解液稀釋后是否會顯著影響標準曲線。如果本裂解液對于標準曲線無顯著影響，則可以使用本裂解液。用Western及IP細胞裂解液裂解得到的蛋白樣品，可用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑等干擾物質，不能用Bradford法測蛋白濃度。 

使用方法：

1、對于培養細胞樣品
（1）取適當量的裂解液，根據需要自行確定添加適當的抑制劑或不添加抑制劑。
（2）對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1~2sec 后，細胞就會被裂解。
（3）對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入 100~200uL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 5~10×105 細胞/管，然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。
（4）充分裂解后，10000~14000g離心3~5min，取上清，即可進行后續的 PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子檢測等操作。
注：裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加100uL 裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量至 150uL 或 200uL。
2、對于組織樣品
（1）取適當量的裂解液，根據需要自行確定添加適當的抑制劑或不添加抑制劑。
（2）把組織切成細小的碎片。
（3）按照每 20mg 組織加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。
（如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)
（4）用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
（5）充分裂解后，10000~14000g 離心 3~5min，取上清，即可進行后續的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
（6）如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

注意事項：

1、若頻繁使用本品，可以短期4℃保存。若不是頻繁使用本品，建議第一次使用本品的時候將裂解液分裝凍存，避免反復凍融。
2、若需添加蛋白酶或磷酸酶抑制劑，可使用我司的廣譜蛋白酶抑制劑混合物（abs9161），廣譜磷酸酶抑制劑混合物（abs9162），以及PMSF，或者自行準備。
3、裂解樣品的所有步驟需在冰上或4℃進行。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。