核酸轉(zhuǎn)染試劑盒

產(chǎn)品介紹：
該產(chǎn)品是我司在Plasmid Transfection Reagent的基礎(chǔ)上進(jìn)一步研發(fā)成功的專門用于核酸高效轉(zhuǎn)染的試劑盒。它具有非常好的轉(zhuǎn)染性能，可高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)90%以上（Hela細(xì)胞，EGFP質(zhì)粒）。其功能強(qiáng)大，不僅可高效轉(zhuǎn)染較大分子的質(zhì)粒DNA，還可高效轉(zhuǎn)染mRNA、siRNA、mimics和各種小分子DNA。

與目前市場上常見的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同，該試劑盒采用生物可降解材料配制，對細(xì)胞的毒性很低，轉(zhuǎn)染后24小時細(xì)胞幾乎無明顯死亡。它使用也非常方便，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA混合，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細(xì)胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡便。它適合于貼壁細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染，如需轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞，請選擇原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒（abs60324）。如需轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞，請選擇懸浮細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒（abs60325）。

產(chǎn)品特點：
1、強(qiáng)大的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率在貼壁細(xì)胞中可高達(dá)90%以上；
2、轉(zhuǎn)染功能強(qiáng)大，不僅可高效轉(zhuǎn)染大分子質(zhì)粒DNA，還可高效轉(zhuǎn)染mRNA、siRNA、mimics和各種小分子DNA；
3、極低的細(xì)胞毒性：使用可降解生物材料，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對實驗結(jié)果的影響；
4、操作簡便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液。

試劑盒包裝：

轉(zhuǎn)染效率：可高效轉(zhuǎn)染多種貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率在貼壁細(xì)胞中可高達(dá)90%以上；
細(xì)胞死亡率：死亡率不到10%

操作步驟：

一、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染（以24孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A、細(xì)胞接種:
1、轉(zhuǎn)染前一天對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)接，每孔接種0.8-1.2×105個細(xì)胞，使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度為90%左右，且生長良好（非常重要）；
2、最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大、營養(yǎng)不足導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

B、試劑B /DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備(該步完成后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)染):
1、在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基，再加入適量的轉(zhuǎn)染試劑，見附表。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
2、在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基，并加入適量的試劑A，輕輕混勻，再加入適量的DNA，見附表。用移液器再次輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
3、 將DNA-培養(yǎng)基混合物滴加至試劑B-培養(yǎng)基混合物中，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后，立即轉(zhuǎn)染。注意： 試劑B-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。
注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉(zhuǎn)染:
1、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板以使復(fù)合物均勻分布。加完后，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
2、培養(yǎng)12小時后即可觀察，最佳觀察或收獲時間為24-48小時。
3、試劑B在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基。

二、siRNA轉(zhuǎn)染（以24孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A、 細(xì)胞接種:
1、轉(zhuǎn)染前一天對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)接，使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度為30-50%左右，且生長良好、無支原體污染（非常重要）；
2、 最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大、營養(yǎng)不足導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

B、試劑B /siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備 (該步完成后應(yīng)立即轉(zhuǎn)染):
1、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基，并添加適量的轉(zhuǎn)染試劑(見下表) 。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
2、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul無血清培養(yǎng)基，并添加適量的siRNA（見下表），用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。
3、將siRNA-培養(yǎng)基混合物滴加至試劑B-培養(yǎng)基混合物中，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15-20分鐘后，立即轉(zhuǎn)染。

C、轉(zhuǎn)染:
1、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板。加完后，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
2、37°C培養(yǎng)24-72小時，檢測基因抑制效果。如果需要，細(xì)胞培養(yǎng)4-6小時可以更換培養(yǎng)基，但不是必須。
3、 試劑B 在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基。

儲存/保存方法：

-20°C 保存，使用前請輕輕混勻；有效期1年。

技術(shù)指標(biāo)：

附表 1：質(zhì)粒轉(zhuǎn)染不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

附表 2：siRNA 轉(zhuǎn)染不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件

產(chǎn)品用途：

可高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)90%以上（Hela細(xì)胞，EGFP質(zhì)粒）。試劑A功能強(qiáng)大，不僅可高效轉(zhuǎn)染較大分子的質(zhì)粒DNA，還可高效轉(zhuǎn)染mRNA、siRNA、mimics和各種小分子DNA。

注意事項：

1、剛開始轉(zhuǎn)染，請務(wù)必進(jìn)行優(yōu)化實驗，如24孔板質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，每孔質(zhì)粒用量0.8 ug， 試劑B 可選擇2.0 ul、2.5 ul、3.0 ul、3.5 ul進(jìn)行優(yōu)化。24孔板siRNA轉(zhuǎn)染，試劑B 用量2.0 ul，siRNA用量可選10 pmol、20 pmol、30 pmol、40 pmol進(jìn)行優(yōu)化。
2、 在制備DNA或siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物時，應(yīng)避免體系中存在血清，因血清會干擾試劑B 與DNA或siRNA形成復(fù)合物。培養(yǎng)體系中盡量不要添加抗生素，抗生素會導(dǎo)致培養(yǎng)細(xì)胞死亡。
3、試劑A僅用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，RNA或siRNA轉(zhuǎn)染不需加入試劑A。
4、 請注意質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和siRNA轉(zhuǎn)染時對細(xì)胞密度和轉(zhuǎn)染試劑用量等條件的差異，不要混用同一條件。
5、如果需要質(zhì)粒穩(wěn)轉(zhuǎn)，請在轉(zhuǎn)染24-48小時后加入篩選培養(yǎng)基。
6、 本產(chǎn)品適合于質(zhì)粒DNA、siRNA分別獨(dú)立轉(zhuǎn)染，如需質(zhì)粒DNA、siRNA共轉(zhuǎn)，請選用核酸共轉(zhuǎn)染試劑盒。
本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)臨床用途。

*溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實驗使用，不支持臨床等研究