3D Luminescent Cell Viability Assay

3D細(xì)胞培養(yǎng)物在生理上更相關(guān)，并且能更好地代表體內(nèi)組織，可以更準(zhǔn)確地預(yù)測藥物治療的功效或毒性。3D細(xì)胞模型越來越多地用于了解疾病機(jī)理和發(fā)現(xiàn)藥物療法。與2D培養(yǎng)相比，3D細(xì)胞培養(yǎng)可以更準(zhǔn)確地預(yù)測藥物治療的功效或毒性。
         3D Luminescent Cell Viability Assay是一種基于熒光素酶系統(tǒng)的細(xì)胞活力檢測試劑，借助ATP依賴的熒光素酶催化的熒光素發(fā)光反應(yīng)，通過化學(xué)發(fā)光信號測定細(xì)胞內(nèi)ATP含量，從而檢測細(xì)胞活力。檢測線性范圍寬、靈敏度高、穩(wěn)定性好。
        本試劑盒中由于高純度的熒光素底物、熱穩(wěn)定的熒光素酶和經(jīng)過優(yōu)化的反應(yīng)試劑，使得本產(chǎn)品具有更強(qiáng)的細(xì)胞裂解能力，可用于3D微組織培養(yǎng)的細(xì)胞活力分析。在細(xì)胞培養(yǎng)物中加入本產(chǎn)品使細(xì)胞團(tuán)裂解，釋放出ATP，即可產(chǎn)生如圖所示的反應(yīng)，發(fā)出穩(wěn)定的光信號。發(fā)光強(qiáng)度與ATP的量，即活細(xì)胞數(shù)量在一定范圍內(nèi)成正比，因此本品可對活細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行定量檢測。

產(chǎn)品特性：
3D Luminescent Cell Viability Assay檢測靈敏度高、線性范圍寬，可兼容少量樣品檢測以及大量樣品的高通量篩選。
1、方便快速：試劑盒中提供的檢測試劑為即用型，讀數(shù)穩(wěn)定，檢測速度快，完成檢測僅需約 10 分鐘；
2、靈敏度高：應(yīng)用于 3D 微組織檢測具有更高的信噪比；
3、快速：添加試劑后可在 30min 或更短時間內(nèi)記錄數(shù)據(jù)；
4、發(fā)光信號更穩(wěn)定：發(fā)光信號半衰期超穩(wěn)定，通常＞3 小時。
5、裂解能力更強(qiáng)：經(jīng)過優(yōu)化的反應(yīng)試劑具有更強(qiáng)的細(xì)胞裂解能力，適用于 3D 微組織培養(yǎng)的細(xì)胞活力分析；
6、高通量：可兼容少量樣品檢測以及大量樣品的高通量篩選。

適用于生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性試驗等。

試劑準(zhǔn)備：
1、試劑融化：實驗前一天將試劑取出，置于 4℃過夜融化。也可在實驗當(dāng)天將試劑取出，置于室溫融化，或放置于 22℃水浴融化，但需要注意水溫不可超過 25℃。
2、平衡至室溫：若試劑在非室溫條件下融化，使用前可將其置于 22℃水浴，確保試劑平衡至室溫后再用于檢測。注：一般針對 5mL 包裝需要約 10min；50mL 包裝需要約 20min。
3、混勻：使用前輕柔顛倒 5 次使溶液混合均勻。
檢測步驟：
1、 使用適合進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測的 96 孔板，在其中加入含有細(xì)胞培養(yǎng)基的微組織。
注：（1）制備樣品體積和微組織特性（例如，大小、數(shù)量、培養(yǎng)天數(shù)等）應(yīng)針對實驗條件進(jìn)行優(yōu)化；（2）樣品的總 ATP 含量應(yīng)保持在 10μM 以下（測定線性范圍上限濃度）；（3）多孔板必須與使用的光度計兼容。
2、 將測試化合物添加到實驗孔中，并根據(jù)您的培養(yǎng)方案進(jìn)行孵育。
注：確保樣品和測試化合物的體積足夠低，以允許添加等體積的試劑，然后進(jìn)行混合，而不會造成孔間污染。
3、 將板及其內(nèi)容物平衡至室溫(22-25℃)約 30 分鐘。
4、 添加與每個孔中存在的細(xì)胞培養(yǎng)基體積相等的 3D Reagent 至檢測孔中（例如，對于 96 孔板，將 100μl 3D Reagent 添加到 100μl 含有細(xì)胞的培養(yǎng)基中）。
5、 劇烈混合內(nèi)容物 5 分鐘以誘導(dǎo)細(xì)胞裂解。
注意：混合對于從 3D 微組織中有效提取 ATP 非常重要。
6、 讓板在室溫下再孵育 25分鐘以穩(wěn)定發(fā)光信號。
7、 記錄發(fā)光。
注：板內(nèi)不均勻的發(fā)光信號可能是由溫度梯度、細(xì)胞接種不均勻或多孔板中的邊緣效應(yīng)引起的。

1、溫度：試劑中含有熒光素酶，反復(fù)凍融會影響其活性。建議分裝后置于-20℃避光保存。試劑及細(xì)胞樣品使用前均需平衡至室溫，以避免酶催化效果的影響；
2、化學(xué)因素：熒光素酶的反應(yīng)速率和發(fā)光強(qiáng)度受化學(xué)環(huán)境影響。不同類型的培養(yǎng)基和血清中發(fā)光強(qiáng)度和衰減速率存在差異。另外，藥物含量較高時可能會干擾熒光素酶反應(yīng)，從而影響發(fā)光信號。建議設(shè)置含有藥物的細(xì)胞培養(yǎng)液對照孔以排除溶劑的干擾;
3、光敏感：本試劑對光敏感，如果儲存時暴露在光照下，會加快發(fā)光強(qiáng)度的衰減。如果試劑從原來的容器轉(zhuǎn)移，請確保避光保存；
4、ATP污染：建議操作時佩戴口罩和乳膠手套，避免接觸可能受到污染的表面和設(shè)備。操作時避免多次將槍頭插入試劑瓶中。

1、低于-10℃避光保存。為保證最佳使用性能，長期存儲時，建議置于-70℃。
2、本品反復(fù)凍融6個循環(huán)仍可保持穩(wěn)定。
3、分裝可能導(dǎo)致ATP污染風(fēng)險，避免分裝。