NLuc熒光素酶檢測試劑盒

1、自備材料：
PBS；多道排槍；白色不透光/黑色細(xì)胞培養(yǎng)板；化學(xué)發(fā)光儀或酶標(biāo)儀。
2、檢測前準(zhǔn)備：
（1）預(yù)先將NLuc檢測底物（50×）和NLuc檢測底物緩沖液放置于室溫。
（2）根據(jù)實(shí)際使用量，以1:50的比例將適量的NLuc檢測底物（50×）與NLuc檢測底物緩沖液混勻，室溫避光備用。例如：如果需要10 mL反應(yīng)液，則需要加入0.2 mL的檢測底物。
注：建議現(xiàn)配現(xiàn)用，剩余的含有新型底物的反應(yīng)液在當(dāng)次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后不建議留存。
3、操作方法：
（1）從細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)板，放置5-15 min，恢復(fù)至室溫。
注：使用白色不透光或者黑色的細(xì)胞培養(yǎng)板，減少孔間的信號(hào)干擾。
（2）加入檢測溶液
使用多道排槍向每個(gè)細(xì)胞孔中加入平衡至室溫的含有底物的反應(yīng)液，加樣體積與細(xì)胞培養(yǎng)液體積相同并混勻。例如，96孔板通常加入80-100μL 培養(yǎng)液，相應(yīng)加入80μL-100μL檢測溶液；384孔板通常加入20-30μL 培養(yǎng)液，相應(yīng)加入20-30μL檢測溶液。
（3）發(fā)光檢測
混勻后于化學(xué)發(fā)光儀或酶標(biāo)儀中檢測NLuc熒光素酶報(bào)告基因活性。
注：為得到最佳檢測結(jié)果，請?jiān)诩尤霗z測試劑后1小時(shí)內(nèi)完成檢測。
4、分析數(shù)據(jù)：
（1）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康模诿總€(gè)培養(yǎng)板中都應(yīng)設(shè)置對照組、實(shí)驗(yàn)組和空白對照組。為了保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，理論上每個(gè)實(shí)驗(yàn)組（包括對照組）都應(yīng)當(dāng)減去空白對照組的螢火蟲螢光素酶的發(fā)光測量值。
①空白對照組：
背景F：未轉(zhuǎn)染細(xì)胞+反應(yīng)液。
注：空白對照組的樣品量必須與實(shí)驗(yàn)樣品量相同，包含與實(shí)驗(yàn)樣品相同的培養(yǎng)基/血清組合，并加上相同的檢測試劑。
②實(shí)驗(yàn)組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)化合物處理（即實(shí)驗(yàn)組F）。
③對照組：轉(zhuǎn)染細(xì)胞不經(jīng)處理，用以標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)果（即對照組F）。
（2）計(jì)算結(jié)果：
實(shí)驗(yàn)組=實(shí)驗(yàn)組F-背景F。
對照組=對照組F-背景F。
表達(dá)倍數(shù)=實(shí)驗(yàn)組/對照組。

-20℃保存，有效期一年。NLuc檢測底物（50×）建議分裝-80℃保存。

1、酶促反應(yīng)對溫度較為敏感，加樣檢測前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫（20-25 ℃）再使用；
2、檢測時(shí)需使用白色或黑色的96孔板。如果使用普通透明的96孔板，相鄰孔之間會(huì)產(chǎn)生相互干擾；
3、檢測儀器：能檢測化學(xué)發(fā)光的儀器都適用，但由于不同儀器的設(shè)置和靈敏度不同，測得的光信號(hào)值也會(huì)不同；
4、單管熒光測定儀測定，每個(gè)樣品與測定試劑混合后到測定前的時(shí)間應(yīng)保持一致；
5、為了您的自身安全，實(shí)驗(yàn)前請做好有效防護(hù)；