膠原酶III型，9001-12-1

產(chǎn)品描述：

膠原酶（Collagenase）是一種蛋白水解酶，常用來消化細(xì)胞外基質(zhì)蛋白。作為一種肽鏈內(nèi)切酶，膠原酶特異性識別Pro-X-Gly-Pro序列（高頻出現(xiàn)在膠原collagen，很少在其他蛋白中發(fā)現(xiàn)）并切割氨基酸（X）和Gly之間的肽鍵。不同于其他蛋白酶，膠原酶是一種可識別并降解具三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維，這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織。

膠原酶來源于溶組織梭菌（Clostridiumhistolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有梭菌蛋白酶A（Clostridiopeptidase A），能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維；還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分別用以水解存在結(jié)蹄組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白、多糖和脂質(zhì)等。目前商業(yè)化的膠原酶因所含組分的差異分為五類，其在應(yīng)用上具有一定區(qū)分。

本品是III型膠原酶，活性≥125units/mg凍干物，含較低的次級蛋白酶污染物水解活性，但具典型的膠原酶活性。常用于乳腺組織的原代細(xì)胞制備。

來源：溶組織梭菌

純度：活性＞125CDU/mg

使用方法：

一、儲存液制備：
1、直接往100mg膠原酶內(nèi)加入100µl含鈣鎂的HBSS緩沖液，輕輕漩渦震蕩確保充分溶解混勻。
2、根據(jù)具體批次的酶活力，用含鈣鎂的HBSS緩沖液調(diào)整酶濃度到100U/µl（1000×儲存液），之后用低蛋白吸附濾膜過濾除菌。
3、立即使用或?qū)Υ嬉焊鶕?jù)單次用量分裝，置于-20℃避光保存。
4、使用前置于冰上融化，避免反復(fù)凍融。建議膠原酶的工作濃度范圍50-200U/ml（或0.5-2.5mg/ml），具體使用濃度請根據(jù)具體消化對象或參考文獻(xiàn)來調(diào)整。

二、組織分離：
1、用無菌刀或剪刀將組織切成3-4mm小片，之后用含鈣鎂的HBSS緩沖液清洗組織片幾次；
2、加足量含鈣鎂的HBSS緩沖液浸沒組織片，之后按照50-200U/ml用量加入適量膠原酶；
3、37℃孵育4-18h，置于水平搖床并且孵育體系加入3mM CaCl2可提高消化效率。
4、將消化好的細(xì)胞混合物用無菌的不銹鋼或尼龍網(wǎng)過篩。殘留組織可再添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃孵育以進(jìn)一步解離。
5、將過篩收集到的細(xì)胞用不含膠原酶的HBSS緩沖液清洗幾遍。
6、低速離心，吸掉清洗液。最后用適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)器或手動法進(jìn)行活細(xì)胞數(shù)檢測。

三、器官灌注：
1、將膠原酶加入37℃預(yù)熱含鈣鎂的HBSS緩沖液，使其濃度為50-200U/ml，或根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)體系調(diào)整；另加入3mM CaCl2可提高消化效率。
2、按照針對特定器官的預(yù)優(yōu)化頻率來進(jìn)行灌注；
3、將收集到的細(xì)胞/組織混合碎片用無菌的不銹鋼或尼龍網(wǎng)過篩。殘留組織可再添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃孵育以進(jìn)一步解離。
4、將過篩收集到的細(xì)胞用不含膠原酶的HBSS緩沖液清洗幾遍。
5、低速離心，吸掉清洗液。最后用適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)器或手動法進(jìn)行活細(xì)胞數(shù)檢測。

儲存/保存方法：2-8℃干燥保存，可置于-20℃長期保存，有效期2年。

注意事項(xiàng)：為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。