血漿血清外泌體提取試劑盒

描述：

外泌體是由細胞分泌的包含 RNA 和蛋白質的小囊泡（30-150 nm），在血清/血漿中大量存在。外泌體被認為具有細胞間信使的功能，在特定細胞之間傳遞它們的效應物或信號分子。

外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，本血漿血清外泌體提取試劑盒，組分經過優化處理，適用于血清/血漿中的外泌體提取，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。

產品組分：

使用方法：

自備材料：
高速離心機（可達到 12000 rpm 轉速），渦旋振蕩器；1.5 mL 離心管，PBS 緩沖液、制冰機。

一、樣品預處理：
1、離心機在使用前先于 4℃預冷 10 min；
2、取樣：如果是凍存樣品，從冰箱取出后于 2-8℃條件下進行解凍；如果是新鮮樣品，收集樣品后置于 2-8℃保存；
3、將樣品按照 500 μL /管進行分裝，不足部分用 1×PBS 補足至 500 μL。

二、去除雜蛋白：
1、Solution A 從試劑盒中取出后，放置到冰箱冷凍層中至少 1 小時以上，取出預冷的Solution A 置于碎冰上；
2、加 Solution A：在 500 μL 血液樣品中加入 400 μL 預冷的 Solution A，立即將離心管蓋緊，通過渦旋振蕩器充分混勻 30 s；
3、離心去蛋白：將混勻后的樣品于 4℃以12000 rpm 離心 20 min，去除樣品中的雜蛋白；
4、上清液轉移：去除雜蛋白的離心上清液轉移至新的 1.5mL 離心管中。

三、提取外泌體：
1、加 Solution B：在去除雜蛋白的離心上清液中加入 120 μL 的 Solution B；
2、溶液混合：加入 Solution B 試劑后將離心管蓋緊，通過渦旋振蕩器充分混勻 2 min；再放置于室溫下靜置 5 min；
3、沉淀外泌體：將裝有混合液的離心管于 4℃以 12000 rpm 離心 15 min，棄上清；
4、再次離心：將含有沉淀的離心管再次于 4℃以 12000 rpm 離心 2 min，棄上清（注：盡可能吸凈上清液），并將 1.5 mL 離心管于室溫下敞口靜置 10 min；
5、外泌體重懸：取 200 μL 的 1×PBS 均勻吹打離心沉淀物，待其溶解后，將重懸液轉移至新的 1.5 mL 離心管中；
6、收獲外泌體顆粒：將含有重懸液的 1.5 mL離心管于 4℃以 12000 rpm 離心 5 min，保留上清液，該上清液中富含外泌體顆粒。
（注：此時可能有較多沉淀，為正常現象）

四、純化外泌體：
1、外泌體純化：將收獲的外泌體顆粒粗品轉入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃以 5600 rpm 離心 20 min，離心后收集 EPF 柱管底的液體，此液體即為純化后的外泌體顆粒；（注：EPF 柱不可重復使用）
2、外泌體的保存：純化后的外泌體以50-100 μL 進行分裝保存于-80℃低溫冰箱中，以備后繼實驗使用。

儲存/保存方法：

收到產品后將試劑分開儲存，使用前請充分混勻。