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                Products產(chǎn)品中心
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                小鼠正常肺類器官培養(yǎng)基

                簡(jiǎn)要描述:小鼠正常肺類器官培養(yǎng)基可應(yīng)用于小鼠正常肺來源類器官的常規(guī)培養(yǎng)傳代,能夠保持其傳代后的生長(zhǎng)活力,類器官培養(yǎng)過程中,不用添加任何其他蛋白因子。

                • 產(chǎn)品型號(hào):abs9541
                • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
                • 更新時(shí)間:2025-06-13
                • 訪  問  量:3032

                詳細(xì)介紹

                品牌absin貨號(hào)abs9541
                規(guī)格100mL;500mL供貨周期現(xiàn)貨
                應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥,綜合

                描述:

                小鼠正常肺類器官培養(yǎng)基可應(yīng)用于小鼠正常肺來源類器官的常規(guī)培養(yǎng)傳代,能夠保持其傳代后的生長(zhǎng)活力,類器官培養(yǎng)過程中,不用添加任何其他蛋白因子。


                使用方法:

                1、原代 
                (1)取材后的組織放在預(yù)冷的(2-8°C)組織保存液的取樣瓶中,快速轉(zhuǎn)運(yùn)至潔凈實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行組織處理和細(xì)胞分離,拍照并登記信息。
                (2)準(zhǔn)備若干培養(yǎng)皿,加入 4℃預(yù)冷的小鼠正常肺類器官組織原代培養(yǎng)緩沖液#abs9731備用。
                (3)取樣瓶消毒,將組織放入培養(yǎng)皿中,利用小鼠正常肺類器官組織原代培養(yǎng)緩沖液清洗三次后,利用眼科剪或手shu刀將組織jian切成體積約為 1-3mm3的組織塊。
                (4)組織用小鼠正常肺原代zuzhi消化液#abs9522 消化,37℃震蕩消化10-20min,(消化過程中隨時(shí)觀察消化情況)。
                (5)取少量液體在顯微鏡下觀察,鏡下觀察到較多的單個(gè)細(xì)胞或 70um 以下的細(xì)胞簇后,加入三倍體積小鼠正常肺類器官組織原代培養(yǎng)緩沖液終止消化。
                (6)使用100um孔徑的篩網(wǎng)進(jìn)行過濾,將濾液收集后,于300g富集離心5min后移去上清,添加小鼠正常肺類器官組織原代培養(yǎng)緩沖液重新重懸離心。
                (7)基質(zhì)膠計(jì)算:第6步后觀察收集到的組織體積,添加25倍組織體積的基質(zhì)膠#abs9495 重懸鋪板。
                (8)24孔細(xì)胞培養(yǎng)板為例,每孔點(diǎn)膠25ul組織基質(zhì)膠混合物進(jìn)行鋪板(4℃下操作)。
                (9)將鋪好的培養(yǎng)板放入37℃培養(yǎng)箱中10-15min成膠,添加小鼠正常肺類器官培養(yǎng)基(恢復(fù)室溫)進(jìn)行培養(yǎng)。


                2、類器官傳代培養(yǎng)
                (1)移液槍吸去培養(yǎng)基,每孔添加1-2ml 4℃類器官傳代培養(yǎng)緩沖液#abs9730放置2min。
                (2)移液槍輕柔吹打基質(zhì)膠,收集在15ml離心管中,4℃靜置10min。(每6-8孔為一組)
                (3)a:類器官數(shù)量不足或體積較小時(shí): 離心5min棄去上清,添加適量小鼠正常肺類器官傳代培養(yǎng)緩沖液重懸移入1.5ml離心管,300g離心5min棄去液體進(jìn)行第4步。
                         b:類器官數(shù)量較多或體積較大時(shí):離心5min棄去上清,添加適量類器官傳代消化液#abs9520 消化2-3min,添加小鼠正常肺類器官傳代培養(yǎng)緩沖液終止消化,離心5min棄去混合液,添加適量小鼠正常肺類器官傳代培養(yǎng)緩沖液重懸移入1.5ml離心管,300g離心5min棄去液體進(jìn)行第4步。
                (4)類器官收集后,添加基質(zhì)膠重懸,每孔25ul基質(zhì)膠鋪在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,放置培養(yǎng)箱中10-15min添加500ul小鼠正常肺類器官培養(yǎng)基


                3、類器官凍存
                (1)移液槍吸去培養(yǎng)基,每孔添加1-2ml 4℃類器官傳代培養(yǎng)緩沖液放置2min。
                (2)移液槍輕柔吹打基質(zhì)膠,收集在15ml離心管中,4℃靜置10min。(每6-8孔為一組)
                (3)離心5min棄去上清,添加適量小鼠正常肺類器官傳代培養(yǎng)緩沖液再次重懸,300g離心5min棄去液體。
                (4)添加適量類器官凍存液#abs9519,輕柔吹打重懸,以24孔細(xì)胞培養(yǎng)板為例:密度為2個(gè)孔凍存1管,每管體積1.4ml。
                (5)做好標(biāo)記信息,進(jìn)行程序降溫后,移入液氮長(zhǎng)期保存。


                4、類器官?gòu)?fù)蘇
                (1)取10ml小鼠正常肺類器官傳代培養(yǎng)緩沖液于15ml離心管中。
                (2)從液氮罐中取出凍存的類器官細(xì)胞,快速置于 37℃水浴鍋中融解。
                (3)水浴融解過程中,需輕輕搖動(dòng)冷凍管,以確保凍存液在 1-2min內(nèi)融解。
                (4)將溶解后的類器官細(xì)胞快速轉(zhuǎn)移至15ml 離心管,使用移液管輕輕吹打6-8次,300g 離心 5min,然后除去上清液并收集類器官細(xì)胞沉淀。添加適量小鼠正常肺類器官傳代培養(yǎng)緩沖液重懸移入1.5ml離心管300g離心5min。
                (5)基質(zhì)膠重懸,每孔25ul基質(zhì)膠鋪在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,放置培養(yǎng)箱中10-15min成膠,添加500ul小鼠正常肺類器官培養(yǎng)基

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