使用牛垂體提取物工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全,必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn).對(duì)于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是ClassII）操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。定期檢測(cè)下列項(xiàng)目，CO2鋼瓶的CO2壓力，CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時(shí)更換）。無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和...

血清小知識(shí)血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，而且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無機(jī)物等，其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出...

Q：步驟上的可選步驟能否省略？A：該試劑盒是經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的，再進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的時(shí)候?qū)嶒?yàn)室都是要做這個(gè)可選步驟的，建議不要省略，按照說明書操作。Q：proteinA和proteinGbeads怎么選？A：各5ul就可以了Q：超聲破碎冰上操作是必須的嗎？4℃條件能否微調(diào)？A：建議冰上操作，4℃是可以微調(diào)的。Q：beads出現(xiàn)吸不出來的情況，怎么處理？A：吸之前需注意槍頭要剪一下再吸，如若beads吸不上來，可加入等體積的20%乙醇混勻后再吸。Q：如果沒有超聲破碎儀的話，能不能用酶解...

1、血清封閉：組織切片上有剩余的位點(diǎn)可以與一抗非特異性結(jié)合，造成后續(xù)結(jié)果的假陽(yáng)性；因此需要使用封閉劑進(jìn)行封閉。常用試劑為血清和BSA等。封閉血清一般是和二抗同一來源的，但不能與一抗來源一致。2、一抗和二抗?jié)舛群头跤龝r(shí)間：一抗孵育條件在免疫組化反應(yīng)中zui重要，包括孵育時(shí)間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果*；孵育時(shí)間與溫度、抗體濃度有關(guān)，一般37度1-2h，4度過夜（從冰箱拿出后37度復(fù)溫45min）。具體條件還要摸索。二抗一般室溫或37度30m...

標(biāo)簽抗體，別名為抗原表位，又稱抗原決定簇，是抗原分子中決定抗原特異性的特殊區(qū)域或基團(tuán)，是與抗體特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)或序列。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，科研人員可以通過DNA重組技術(shù)，構(gòu)建包含目的基因以及表位標(biāo)記的融合蛋白，進(jìn)而通過特異性標(biāo)簽抗體對(duì)其鑒定與純化，以達(dá)到研究的需求。常用的標(biāo)簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。1.Flag標(biāo)簽—抗Flag標(biāo)簽抗體Flag標(biāo)簽系統(tǒng)是利用一個(gè)短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標(biāo)蛋白。Flag標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該...

1、標(biāo)本固定：固定的目的是：①，防止標(biāo)本從玻片上脫落；②，除去防礙抗原—抗體結(jié)合的類脂，使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果；③，固定的標(biāo)本易于保存。固定劑的選擇一般用4%多聚甲醛。2、脫水、石蠟包埋和制片：脫水用梯度乙醇（由低到高）充分脫水、對(duì)組織要*浸蠟、切片時(shí)刀片要干凈和鋒利。否則容易裂片和脫片等。3、脫蠟和水化：這是為了后面的抗體等試劑能夠充分與組織中抗原等結(jié)合反應(yīng)。脫蠟可以先60度20min，然后立即二甲苯1-3分別10min，但當(dāng)天制好的切片可以60度3-4h。...

Q:什么是霍亂毒素？A:霍亂毒素由（Choleratoxin,CT）兩個(gè)亞單位組成，即A亞單位（CTA）和B亞單位（CTB）。A亞單位是霍亂毒素的活性部分，B亞單位的主要功能是通過與哺乳動(dòng)物小腸上皮細(xì)胞上的單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂GM1結(jié)合而使得A亞單位進(jìn)入細(xì)胞。Q:霍亂毒素是如何反激活的？A:霍亂毒素由霍亂操縱子（ctx）編碼，從5'到3'方向，依次是反激活因子ToxR的識(shí)別序列、啟動(dòng)子、A基因（ctxA）、B基因（ctxB）和不依賴于r因子的轉(zhuǎn)錄終止系列。現(xiàn)在普遍認(rèn)為操縱子中只...

血清小知識(shí)血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，而且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無機(jī)物等，其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出...